红斑丹毒丝菌C43065株甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因的克隆与表达

发布时间：2017-05-28 21:13

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【摘要】：目的克隆和表达红斑丹毒丝菌甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)基因。方法采用PCR从红斑丹毒丝菌C43065株基因组中扩增编码GAPDH的gapC基因片段,将其克隆至原核表达载体pET32a(+)的BamHⅠ和KpnⅠ多克隆位点上,构建重组载体pET32a-gapC,转化大肠埃希菌BL21(DE3),在IPTG诱导下表达N端带有Trx的重组蛋白GapC,用SDS-PAGE和Western blot检测表达产物。结果扩增得到的C43065株gapC基因片段大小为1 005bp,与已报道的红斑丹毒丝菌Fujisawa株gapC基因核苷酸序列的同源性为99%。SDS-PAGE结果显示表达蛋白分子质量单位约为57ku,与预期的大小相近。Western blot检测结果显示表达的重组蛋白GapC能与抗6个组氨酸标签鼠单克隆抗体发生特异性反应。结论用大肠埃希菌表达系统成功表达GapC蛋白,可用于红斑丹毒丝菌GapC生物学功能的进一步研究。
【作者单位】： 伊犁师范学院生物与地理科学学院;
【关键词】： 红斑丹毒丝菌 甘油醛--磷酸脱氢酶 基因克隆 原核表达
【基金】：国家自然科学基金项目(No.31360613;31072142)
【分类号】：R378
【正文快照】： ***红斑丹毒丝菌(Erysipelothrix rhusiopathiae)是引起猪丹毒、禽类败血症、人类丹毒、鱼类脏器出血和肾脏病变等疾病的重要致病菌,给养殖业造成严重损失,亦给食品卫生和人体健康带来威胁[1]。红斑丹毒丝菌有16种血清型(1a、1b、2、4、5、6、8、9、11、12、15、16、17、19、2

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本文编号：403493