阴道毛滴虫RRas基因序列的cDNA一步克

发布时间：2017-05-29 17:04

  本文关键词：阴道毛滴虫RRas基因序列的cDNA一步克隆、表达及鉴定，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的一步克隆、表达及鉴定阴道毛滴虫RRas基因,以了解其在组织细胞定位和功能。方法用PCR方法从阴道毛滴虫cDNA文库中扩增RRas片段,用一步克隆法构建RRas-PQE-80L载体,进行菌落PCR和酶切鉴定,阳性克隆提取质粒,经测序鉴定后转化至大肠埃希菌(E.coli)BL21,经异丙硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导。表达产物用NiAgarose His纯化试剂盒纯化,纯化产物经SDS-PAGE电泳鉴定和Western blot分析。结果从阴道毛滴虫cDNA表达文库中扩增的RRas基因片段长617bp,酶切及DNA测序证实RRas-PQE-80L重组质粒构建正确。表达的融合蛋白分子质量单位约为23.6ku,该蛋白能被抗His标签抗体识别。结论成功构建重组原核表达质粒RRas-PQE-80L载体,并能在E.coli BL21中表达,表达蛋白具有反应原性。
【作者单位】： 郑州大学基础医学院人体寄生虫学教研室;
【关键词】： 阴道毛滴虫 RRas基因 一步克隆 原核表达 Western blot
【分类号】：R382.2
【正文快照】： *?Ras基因作为一种从肿瘤细胞中分离的转化基因,表达的RAS蛋白具有小GTP酶的活性,调节细胞的生长、增殖和分化。RAS相关GTP酶具有传达细胞外信号至效应细胞的功能,具有激活与失活两种活性状态,前者与GTP结合,后者与GDP结合,是GT-Pase的开关蛋白。RAS信号通路RAF/MEK/ERKh和PI3

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