KSHV K15P慢病毒载体的构建及其滴度测定

发布时间：2017-05-30 08:00

  本文关键词：KSHV K15P慢病毒载体的构建及其滴度测定，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的构建含卡波肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)ORF K15P基因的慢病毒载体,并对其在293T细胞内的表达进行研究。方法 PCR法扩增获得KSHV K15P基因,限制性内切酶Nhe I酶切和无缝克隆法构建重组慢病毒载体p CDHCMV-K15P-GFP,通过脂质体转染试剂将重组慢病毒载体与3种辅助质粒p MDL-PRRE、pRSV-Rev和p MD2.g共转染HEK 293T细胞包装产生慢病毒,Western blot法检测K15P蛋白的表达。结果经酶切及测序鉴定,成功构建慢病毒载体,重组慢病毒质粒与辅助质粒共转染HEK 293T细胞可见有荧光表达,说明K15P基因在细胞内有表达并且96 h后产生4×106TU/ml滴度为慢病毒。结论成功构建了KSHV K15P慢病毒表达载体p CDH-CMV-K15P-GFP,获得高效表达K15P基因的慢病毒颗粒,为后续其在细胞内的功能研究奠定实验基础。
【作者单位】： 安徽医科大学微生物学教研室;合肥市第三人民医院检验科;
【关键词】： 卡波肉瘤相关疱疹病毒 KP基因 慢病毒
【基金】：国家自然科学基金(编号:81271837) 安徽省高校省级科学研究项目(编号:KJ2012A161) 安徽医科大学博士科研经费资助项目(编号:XJ200914)
【分类号】：R373
【正文快照】： 2016-06-02接收卡波肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi sarcoma-associ-ated herpesvirus,KSHV),又被称为人类疱疹病毒8型(human herpesvirus 8,HHV-8),属于γ疱疹病毒亚科。华裔科学家Chang et al[1]于1994年在卡波肉瘤(Kaposi's sacoma,KS)组织中发现该病毒,其除了是引起KS的病原体,

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 王淑艳;张愚;;慢病毒载体的设计及应用进展[J];中国生物工程杂志;2006年11期

2 黄芳;王毅刚;蔡荣;杨光华;钱程;;可诱导慢病毒载体的优化策略及应用[J];细胞生物学杂志;2007年06期

3 毛颖佳;郑源强;石艳春;;慢病毒载体及其应用的研究进展[J];中国生物制品学杂志;2009年02期

4 张薇;赵志英;张坤;;慢病毒载体及应用研究进展[J];包头医学院学报;2011年05期

5 徐晓明;杨慧;王晓萍;;慢病毒载体的构建及优化[J];中国临床康复;2006年09期

6 王晓通;李雷;钱倩;谢玉波;肖强;;转录因子E2F-1基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定[J];广西医科大学学报;2010年02期

7 曹金芳;李伟宏;邓辉;王惠宁;;核心结合因子α1过表达慢病毒载体的构建及鉴定[J];中国现代医生;2010年33期

8 何佳平;张敬之;;慢病毒载体转录“通读”改进研究进展[J];生物工程学报;2011年11期

9 傅鹏;原理;李金花;王春花;李林;原爱红;马骏;;小鼠动力蛋白激活蛋白1-shRNA慢病毒载体的构建及在足细胞中的敲低效应[J];第二军医大学学报;2012年10期

10 刘欣春;朱悦;;靶向大鼠Nogo受体基因的小发夹RNA慢病毒载体的构建及病毒包装[J];山西医药杂志;2012年11期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 冯东福;毕永延;陈二涛;王永志;楚胜华;;小鼠pLVX-Wnt3a-IRES-ZsGreen1慢病毒载体的构建及神经干细胞转染[A];中华医学会神经外科学分会第九次学术会议论文汇编[C];2010年

2 王海彬;;雌激素相关受体α基因超表达慢病毒载体的构建[A];中华医学会第六次全国骨质疏松和骨矿盐疾病学术会议暨中华医学会骨质疏松和骨矿盐疾病分会成立十周年论文汇编[C];2011年

3 张晓宇;秦宜德;王超;张文晓;王巍;何晓光;;牛乳铁蛋白肽基因的慢病毒载体构建[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2010年学术交流会论文集[C];2010年

4 杨龙江;侯健;;构建含有人血小板因子4和其片段的慢病毒载体[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年

5 陈丹;李东野;潘德锋;吴培;郎娅淞;;构建pXZ208/gfp-akt1慢病毒表达载体促心肌细胞存活[A];中华医学会第11次心血管病学术会议论文摘要集[C];2009年

6 苏冠华;刘启云;卢永昕;孙雨霏;帅欣欣;刘晓明;;人肝细胞生长因子慢病毒载体的构建及其在成肌细胞中的表达[A];中华医学会第11次心血管病学术会议论文摘要集[C];2009年

7 刘晓艳;方红;朱定仙;张好;;基于miR30骨架的HPSE-shRNA慢病毒载体的构建及其效应研究[A];2012全国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2012年

8 王治校;李大主;毛晓波;林静;周运锋;王磊;;小鼠FOXP3-siRNA慢病毒载体的构建和鉴定[A];中华医学会第11次心血管病学术会议论文摘要集[C];2009年

9 周亚锋;杨向军;李红霞;蒋文平;;起搏基因HCN4慢病毒载体的构建[A];中华医学会第11次心血管病学术会议论文摘要集[C];2009年

10 姚文龙;张传汉;钱巍;祝畅;邱瑾;桂伶俐;田玉科;;Cdh1基因RNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定[A];2008年中华医学会全国麻醉学术年会论文汇编[C];2008年

中国博士学位论文全文数据库 前3条

1 徐世永;慢病毒载体法高效转基因鸡制备技术研究[D];南京农业大学;2007年

2 张文卿;HCMV pp150表达及E1-pp65慢病毒载体刺激T细胞免疫应答的研究[D];山东大学;2006年

3 林元邦;改进型复制缺陷性腺病毒（HDAd）转基因载体特异性及稳定性研究[D];天津医科大学;2012年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 邓乃刚;p.93K-T QDPR基因慢病毒过表达载体的构建[D];河北联合大学;2014年

2 苏一鸣;构建过表达神经生长因子β亚基基因的慢病毒载体的实验研究[D];福建医科大学;2010年

3 李雄;rPNCE-Lenti1259慢病毒载体的构建及转染人类胚胎干细胞[D];中南大学;2009年

4 于淼;小鼠DND1慢病毒载体的构建及病毒生产[D];湖南师范大学;2010年

5 李朋;PR1-HLA-A*0201单链三聚体慢病毒载体的构建及初步研究[D];扬州大学;2011年

6 徐云云;IK6基因特异性ShRNA慢病毒载体的构建与鉴定[D];华中科技大学;2013年

7 方_g聃;用慢病毒载体作为模型研究具有保护内含子作用的元件[D];上海交通大学;2009年

8 杨馨;NR2B慢病毒载体构建和病毒生产[D];华东师范大学;2006年

9 陶颖;基于重组慢病毒的新型HBV表型分析系统[D];重庆医科大学;2013年

10 操储云;4个沉默鸡Ii基因慢病毒载体的构建及其效果比较[D];安徽农业大学;2014年

  本文关键词：KSHV K15P慢病毒载体的构建及其滴度测定，由笔耕文化传播整理发布。

，

本文编号：406660