鼠源吲哚胺2,3-双加氧酶活性检测方法的建立

发布时间：2017-06-07 15:02

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【摘要】：目的建立鼠源吲哚胺2,3-双加氧酶(mouse indoleamine 2,3-dioxygenase,mIDO)活性检测方法。方法利用基因工程方法表达纯化重组mIDO(recombinant mIDO,rmIDO),建立酶水平mIDO活性检测体系;构建过表达mIDO的小鼠Lewis肺癌(Lewis lung cancer,LLC)细胞株,建立细胞水平mIDO活性检测体系。比较L-1-甲基色氨酸(L-1-methyl tryptophan,L-1-MT)在酶及细胞水平上对mIDO及人源IDO(human IDO,hIDO)的抑制作用,测定抑制类型、抑制常数Ki值及半数抑制浓度(IC50)值。结果 L-1-MT对mIDO和hIDO均有抑制作用,抑制类型及抑制常数Ki值相似,但IC50值在酶水平及细胞水平上均有差异。结论 mIDO酶活性检测体系是筛选IDO抑制剂的有效工具,与hIDO酶活性检测体系联用,能反映种属差异,可更好地利用小鼠模型来替代人类进行IDO抑制剂治疗疾病的研究。
【作者单位】：复旦大学生命科学学院生物化学系;云南天然产物与生物制药协同创新中心;
【关键词】： 吲哚胺 -双加氧酶 鼠源人源 活性检测体系 L--甲基色氨酸
【基金】：国家自然科学基金(81373396) 高等学校博士学科点专项科研基金(20130071110037) 上海市科委生物医药重点课题(12431900204)~~
【分类号】：R392-33
【正文快照】： 吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)是哺乳动物中催化色氨酸沿着犬尿氨酸途径(kynurenine pathway)代谢的第一个限速酶[1],也是细胞内一种含亚铁血红素的单体胞质蛋白酶,最早被发现于1967年[2],广泛分布于人和动物的细胞和组织中[3]。人源IDO(human IDO,hID

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