H7N9流感病毒血凝素在昆虫杆状病毒表达系统中的表达及抗血清的制备

发布时间：2017-06-13 09:11

  本文关键词：H7N9流感病毒血凝素在昆虫杆状病毒表达系统中的表达及抗血清的制备，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:利用昆虫杆状病毒表达系统表达H7N9流感病毒血凝素(HA),以获得的重组血凝素(rHA1)蛋白免疫家兔制备抗rHA1血清,以用于单向免疫扩散(SRID)法检测H7N9流感病毒裂解疫苗HA含量。方法:构建含H7N9 HA1基因的重组杆状病毒,转染Sf9细胞表达rHA1蛋白。用rHA1蛋白免疫家兔获得抗rHA1血清。通过血凝抑制(HI)法和SRID法检测抗血清的HI效价、特异性和线性范围。结果:rHA1蛋白在昆虫杆状病毒表达系统中成功实现分泌表达,经纯化后纯度≥90%。不同剂量的rHA1蛋白免疫家兔后获得抗rHA1血清,HI效价分别为1 280和5 120。SRID试验中可与H7N9抗原国际参考品反应并产生沉淀环,10μg·m L~(-1)到40μg·m L~(-1)抗原浓度范围内沉淀环直径与抗原浓度线性正相关,R~2大于0.99,与H1N1、H3N2和B型流感病毒无交叉反应。用该免疫血清和H7N9抗血清国际参考品分别检测H7N9流感病毒裂解疫苗HA含量,两者无显著性差异。结论:在大流感发生时,昆虫杆状病毒表达系统表达的rHA1蛋白可以用于制备SRID试验用免疫血清,以用于H7N9流感病毒裂解疫苗HA含量测定。
【作者单位】： 中国食品药品检定研究院;
【关键词】： 流感疫苗有效成分检测 HN流感病毒 rHA蛋白 血凝素 免疫血清 昆虫杆状病毒表达系统 血凝抑制效价 单向免疫扩散
【分类号】：R392-33
【正文快照】： 技术有限公司。His鼠单抗购自天根生化科技(北京)有限公司,Ni2+Sepharose FF亲和层析柱购自GE公司。H7N9抗原国际参考品(编号14/250)、H7N9抗血清国际参考品(编号13/180)购自英国国家生物制品检定所(NIBSC)。甲型H7N9流感病毒裂解疫苗批号为SS201401001、SS201401002和SS20140

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本文编号：446197