运用重叠延伸PCR技术构建SGK3激酶PX结构域突变体

发布时间：2017-06-15 11:01

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【摘要】：目的:构建SGK3激酶PX结构域突变体载体,观察其在人肾胚细胞293T中的表达与定位。方法:利用重叠延伸PCR原则设计引物,合成具有点突变的SGK3突变体,将其连接到p EGFP载体上,测序验证;将所获突变载体瞬时转染人肾胚细胞293T,利用荧光倒置显微镜检验突变体在细胞中的表达及功能实现。结果:测序结果表明合成了具有点突变的SGK3序列;荧光倒置显微镜下SGK3突变体相较野生型SGK3在293T细胞内的不均匀分布表明转染成功,突变体载体在人肾胚细胞293T中获得表达且有所定位。结论:通过改变PX结构域序列上第90位氨基酸可以使SGK3激酶失去定位的功能,从而为研究SGK3在细胞中的功能提供基础。
【作者单位】： 贵州医科大学;军事医学科学院生物工程研究所;
【关键词】： SGK激酶 重叠延伸PCR PX结构域
【基金】：国家自然科学基金面上项目(81470138,81372770,81372140)
【分类号】：Q78;R3416
【正文快照】： SGK3是属于AGC蛋白家族的激酶。SGK家族有3个同分异构体SGK1、SGK2和SGK3,它们与AKT家族分子的催化域拥有近55%的相同序列[1]。SGK3受转录及转录后磷酸化修饰,在PI3K下游作为连接生长因子、胰岛素、营养物等与细胞生长、增殖、代谢、生存的一条重要途径[2]。近年来随着研究的

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本文编号：452205