Muc2基因沉默可降低益生菌抑制大肠杆菌黏附和侵袭的能力

发布时间：2017-06-16 22:11

  本文关键词：Muc2基因沉默可降低益生菌抑制大肠杆菌黏附和侵袭的能力，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的建立抑制肠上皮细胞基因组中Muc2基因表达的CRISPR/Cas9系统并探索粘蛋白Muc2在鼠李糖乳杆菌GG株(LGG)抑制大肠杆菌K1(Escherichia coli,E.coli k1)株E44黏附和侵袭肠上皮中的作用机制。方法设计2个长20~25 bp的sg RNA分别靶向Muc2,合成sg RNA寡核苷酸序列并构建CRISPR表达载体,转染野生型人结肠癌Ht29细胞,蛋白免疫印迹法检测抑制效率及通过MTT法检测其细胞活力及生长情况后,竞争性排斥分析验证粘蛋白Muc2在益生菌抑制E44黏附侵袭肠上皮中的作用。结果目的sg RNA寡核苷酸双链成功插入酶切后的lenticrisprv2质粒载体中且序列正确;稳定抑制Muc2表达的细胞株筛选成功;Muc2基因沉默后,与空白对照组相比,其表达水平明显降低,抑制率可达81%(P0.01);黏附侵袭实验中E44相对黏附率为72.23%(P0.01),相对侵袭率为81.49%(P0.01),益生菌LGG的抑制E44黏附和侵袭作用明显下调。结论Muc2基因下调明显降低益生菌抑制E44黏附和侵袭肠上皮细胞的能力,提示益生菌刺激Muc2表达上调可能是其强化加固肠粘膜屏障和拮抗致病菌功能的关键性机制之一,并可为肠道细菌性感染疾病的预防治疗提供了一个新手段。
【作者单位】： 南方医科大学公共卫生与热带医学学院//广东省热带病研究重点实验室 微生物学系;南方医科大学P3实验室;南方医科大学第一临床医学院;
【关键词】： Muc LGG E.coli K CRISPER/Cas Ht 侵袭
【基金】：南方医科大学公卫学院院长基金(GW201518) 2015年度广东省级大学生创新创业训练计划项目(201512121026)
【分类号】：R371
【正文快照】： Muc2基因是美国学者Gum等[1]于1989年自人小肠黏膜的c DNA表达文库中克隆得到的一种粘蛋白核心肽基因,定位在染色体11p15.3~15.5上,是编译分泌型粘蛋白Mucin2(Muc2)的主要基因。粘蛋白Muc2是构成肠道粘液层的主要成分,正常时仅在小肠和空肠的杯状细胞中有表达且表达量较低,可

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本文编号：456601