人类诱导多能干细胞的培养、鉴定及其携带的多能性基因-Oct4、Nanog、Lin28和Fgf4表达水平的检测

发布时间：2017-06-20 00:08

  本文关键词：人类诱导多能干细胞的培养、鉴定及其携带的多能性基因-Oct4、Nanog、Lin28和Fgf4表达水平的检测，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:观察人类诱导多能干细胞在体外的培养情况与生物学特性,并检测其相关多能性基因的表达水平,为后期定向诱导人类诱导多能干细胞向表皮样干细胞分化奠定实验基础,也为其能够成为组织工程种子细胞新来源提供了可能性。方法:将人类诱导多能干细胞接种在经过辐照处理的CF-01小鼠的胚胎成纤维细胞(feeder细胞)上,加入人类胚胎干细胞完全培养基(含bFGF)培养细胞。将此时的人类诱导多能干细胞分为A1和A2两组,A1组细胞直接进行碱性磷酸酶染色检测,并使用TRIzon裂解液裂解细胞,提取该组细胞的总RNA,进行实时定量PCR检测其相关多能性基因的表达水平;A2组细胞则采用Ⅳ型胶原酶消化法传代,倒置相差显微镜下观察诱导多能干细胞传代后的生长情况和细胞形态。传代至第15代时,A2组细胞同样进行碱性磷酸酶染色检测和实时定量PCR检测相关多能性基因的表达水平。结果:本实验中培养的人类诱导多能干细胞生长情况良好,表现出经典的干细胞克隆样生长,边界清晰,增殖旺盛;A1和A2两组细胞在碱性磷酸酶染色检测中均呈现阳性表现;A1和A2两组细胞进行实时定量PCR检测相关多能性基因结果显示:A1和A2两组中4种基因的相对表达量没有明显差异,无统计学意义(P〉0.05)。结论:本实验中培养的人类诱导多能干细胞可以稳定生长并旺盛增殖,在生物学特性方面也同人类胚胎干细胞相类似。随着人类诱导多能干细胞传递代数的增加,它所表达的相关多能性基因的水平仍与最初的人类诱导多能干细胞的表达水平相接近,并不会因此而出现下调。这为后期本课题组进一步诱导人类诱导多能干细胞定向分化为表皮样干细胞提供了实验基础,也表明了人类诱导多能干细胞作为种子细胞新来源的潜力。
【关键词】：胚胎干细胞 诱导多能干细胞 分化 多能性基因 实时定量PCR
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-8
• 中英文缩略词表8-9
• 第1章 引言9-11
• 第2章 材料和方法11-19
• 2.1 实验材料11
• 2.1.1 组织标本11
• 2.2 主要仪器和试剂11-12
• 2.2.1 主要仪器11
• 2.2.2 主要试剂11-12
• 2.2.3 主要溶液的配置及保存12
• 2.3 实验方法12-18
• 2.3.1 实验分组12
• 2.3.2 饲养层（feeder）的制备12-13
• 2.3.3 人类诱导多能干细胞的培养13-14
• 2.3.4 人类诱导多能干细胞的鉴定14-15
• 2.3.5 采用Real-Time Quantitative PCR技术检测人类诱导多能干细胞中多能性基因的表达水平15-18
• 2.4 统计分析18-19
• 第3章 结果19-24
• 3.1 细胞形态学观察19-22
• 3.1.1 复苏后MEF生长情况19-20
• 3.1.2 人类诱导多能干细胞生长情况20-22
• 3.2 碱性磷酸酶染色（AP染色）结果22-23
• 3.3 应用Real-Time Quantitative PCR检测两组细胞多能性基因表达水平23-24
• 第4章 讨论24-31
• 第5章 结论31-32
• 致谢32-33
• 参考文献33-37
• 攻读学位期间获得的研究成果37-38
• 综述 诱导多能干细胞的研究现状及其面临的问题38-48
• 参考文献45-48

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