埃可病毒6型表面特异性抗原VP1的原核表达及其多克隆抗体的制备

发布时间：2017-06-22 19:16

  本文关键词：埃可病毒6型表面特异性抗原VP1的原核表达及其多克隆抗体的制备，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的原核表达埃可病毒6型表面特异性蛋白VP1,并制备其多克隆抗体。方法筛选VP1蛋白氨基酸序列中抗原性强的片段,优化基因序列,分别构建重组表达质粒p GEX-4T-2-vp1和p ET-28a-vp1。将经双酶切及测序鉴定正确的重组质粒转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,进行15%SDS-PAGE鉴定。将融合蛋白VP1-GST及VP1-His分别用Glutathione resin和High Affinity Ni-NTA resin进行纯化。以纯化后的VP1-His融合蛋白作为免疫原免疫新西兰大耳白兔,制备多克隆抗体,以VP1-GST融合蛋白为检测抗原,间接ELISA法检测血清抗体效价,Western blot法检测血清抗体特异性。结果经双酶切及测序鉴定证明,重组质粒p GEX-4T-2-vp1和p ET-28a-vp1构建正确。VP1-GST和VP1-His融合蛋白的相对分子质量分别为38 000和19 000,两种融合蛋白分别以可溶性蛋白和包涵体形式表达,约占菌体总蛋白的60%和30%,纯化后的纯度均90%。兔抗VP1血清效价为1∶320 000,可与融合蛋白VP1-GST和VP1-His发生特异性结合。结论成功原核表达了融合蛋白VP1-His和VP1-GST,且VP1-His具有良好的免疫原性,其制备的多克隆抗体的特异性较好,为埃可病毒快速检测技术的建立奠定了基础。
【作者单位】： 南京医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系;南京军区军事医学研究所;中国药科大学生命科学与技术学院;
【关键词】： 埃可病毒型 VP蛋白 原核细胞 基因表达 多克隆抗体
【基金】：国家传染病重大专项(2013ZX10004804-003)
【分类号】：R392-33
【正文快照】： 人肠道致细胞病变孤儿病毒(enteric cytopatho-genichuman orphan virus,ECHO virus)简称埃可病毒,是一类单股正链RNA的肠道病毒,有34个血清型。埃可病毒分布于全球各地,在人群中广泛传播和流行[1],可通过呼吸道和消化道传播,其感染可引起多种人类疾病,其中无菌性脑膜炎最为常

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3 周兰霞;唐艳;赵丽;;兰州市柯萨奇病毒、埃可病毒和EB病毒抗体检测分析[J];中国卫生检验杂志;2013年02期

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5 每德;;埃可病毒对孕妇的感染[J];国外医学情报;1981年22期

6 尚凯;;埃可病毒16型引起的发疹症流行[J];预防医学情报;1985年06期

7 陈楷诚,谢若男,黄从明,张泽民,曹镇雄,黄曼瑜,李建基,吴承民;一起埃可病毒引起的发疹性热病暴发调查[J];广东医学;1989年01期

8 朱红军,谢若男,林祥伟,曾嫦;汕头地区人群中埃可病毒抗体的检测[J];实用医学杂志;2002年09期

9 朱冬梅;张玲;朱保权;;637例儿童血清柯萨奇病毒埃可病毒抗体检测分析[J];甘肃医药;2010年01期

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2 钟华清;徐锦;苏犁云;曹凌峰;徐梦华;;上海地区人双埃可病毒致儿童中枢神经系统感染的分子流行病学研究[A];中华医学会第十七次全国儿科学术大会论文汇编（上册）[C];2012年

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4 施德娣;;36例小儿病毒脑膜炎临床分析[A];2005年浙江省儿科学学术年会论文汇编[C];2005年

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1 郑晓奕;钟南山：手足口病中国今年没有集中暴发[N];新华每日电讯;2008年

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