牛轮状病毒VP6蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

发布时间：2017-06-24 13:09

  本文关键词：牛轮状病毒VP6蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的原核表达牛轮状病毒(rotavirus,RV)VP6蛋白,并制备其多克隆抗体。方法根据Gen Bank中登录的牛RV UK株VP6基因序列(X53667.1)设计一对特异性引物,RT-PCR扩增牛RV UK株VP6全长编码区片段,克隆至载体p ET-28a,构建重组表达质粒p ET-28a-Bo-RV-VP6,转染至E.coli Rosetta(DE3),IPTG诱导表达,重组蛋白进行SDS-PAGE和Western blot分析。将重组蛋白与弗氏佐剂混合后免疫豚鼠,共免疫3次,每次间隔2周,末次免疫后2周,经心脏采血,分离血清,制备VP6多克隆抗体,Western blot法检测其与牛RV的反应原性。结果经双酶切和测序鉴定,重组表达质粒p ET-28a-Bo-RV-VP6构建正确。重组蛋白以包涵体的形式表达,表达产物分别为43 000、34 000、27 000和15 000 4种不同相对分子质量的重组蛋白,纯化后纯度可达95%以上,可与牛RV阳性血清发生特异性反应。制备的VP6蛋白多克隆抗体效价1∶7 000,且可识别RV天然VP6蛋白。结论原核表达了牛RV VP6蛋白,并制备了抗VP6多克隆抗体,为后续RV疫苗效力评价及RV侵入机理等方面的研究奠定了基础。
【作者单位】： 黑龙江八一农垦大学预防兽医学省重点实验室;
【关键词】： 牛轮状病毒 VP基因 原核细胞 基因表达 多克隆抗体
【基金】：黑龙江省自然科学基金(C2015042,QC2013C028) 国家自然科学青年基金项目(31502098,31201909) 黑龙江博士后科研启动资助项目(LBH-Q13134)
【分类号】：S852.4;R392
【正文快照】： A群轮状病毒(rotavirus,RV)是造成世界范围内幼龄动物及婴幼儿重度胃肠炎的主要病原体之一,给畜牧业发展和人类健康造成巨大危害[1]。RV属于呼肠病毒科,基因组含有11条分节段的双链RNA,共编码6个结构蛋白与6个非结构蛋白[2]。RV粒子为3层衣壳结构,具有感染性RV粒子最外层衣壳

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2 边亚娟;林长水;王玉玲;李一经;;抗猪轮状病毒VP6单克隆抗体的制备与鉴定[J];东北农业大学学报;2006年04期

3 陈淑红,李一经,师东方;猪轮状病毒地方株JL94株VP6基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达[J];畜牧兽医学报;2004年04期

4 ;[J];;年期

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1 陈淑红;猪轮状病毒地方株的分离鉴定及其VP6基因的克隆与原核表达[D];东北农业大学;2003年

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本文编号：478287