N末端Strep蛋白标签表达载体的构建和应用

发布时间：2017-06-25 17:11

  本文关键词：N末端Strep蛋白标签表达载体的构建和应用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的构建携带N末端Strep(NS)蛋白标签的表达载体;在表达载体中构建衣原体RNA聚合酶亚基重组蛋白并表达。方法采用PCR的方法,通过引物引入NS蛋白标签和新的多克隆位点替代p ET21c-DH质粒中原有的T7蛋白标签和多克隆位点,选择新引入的Not I酶切位点进行PCR产物的环化自连,转化DH-5α细菌后筛选阳性菌株,PCR法和基因测序法鉴定新构建的表达载体;在新构建表达载体的Bam H I和Sal I位点之间分别插入衣原体RNA聚合酶核心酶的α、β、β'亚基,获得表达NS-α、NS-β、NS-β'融合蛋白的表达载体,转化表达菌株Arctic Express,筛选阳性表达菌株,并用考马斯亮蓝染色、Western blot等法鉴定融合蛋白的表达情况。结果成功构建了携带NS蛋白标签的p ET21c-NSMCS载体,并成功将其应用于衣原体RNA聚合酶核心酶亚基融合蛋白的构建及表达。结论获得稳定表达NS-α、NS-β、NS-β'融合蛋白的表达载体,为研究衣原体基因转录调控奠定了良好的基础。
【作者单位】： 南通大学附属第三人民医院临床药学室;南通大学药学院;
【关键词】： Strep蛋白标签 表达载体 融合蛋白 克隆 RNA聚合酶 衣原体
【基金】：国家自然科学基金资助项目(No 31370209;31400165) 南通大学研究生科研创新计划项目(No 13025166) “青蓝工程”资助项目
【分类号】：R3416
【正文快照】： 蛋白标签是指利用DNA体外重组技术与目标蛋白基因融合表达的一种多肽或蛋白,常用于目标蛋白的构建、表达、检测、示踪及纯化[1]。在重组蛋白研究过程中,通常使用亲和性标签(如His、GST、Strep)等。主要因这些亲和标签能使重组蛋白的纯化、检测、固定等变得更方便易行。同时,蛋

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 陆庭嫣;唐振华;吴礼堂;;RapID STR系统和API 20 Strep系统临床链球菌鉴定结果的比较[J];江西医学检验;2006年06期

2 李秋珍;由Strep. rishiriensis NK-122产生的一种新的金属-蛋白酶抑制剂(FMPI)[J];国外医学.药学分册;1983年04期

3 梁漱芳;;微生物产生的抗胆固醇物质的筛选方法及Strep.violascens产生一种新的胆固醇氧化酶[J];国外医学参考资料.药学分册;1974年06期

4 ;[J];;年期

中国重要会议论文全文数据库 前1条

1 陆庭嫣;唐振华;吴礼堂;;RapID STR系统和API 20 Strep系统临床链球菌鉴定性能的比较[A];第6次全国微生物学与免疫学大会论文摘要汇编[C];2004年

  本文关键词：N末端Strep蛋白标签表达载体的构建和应用，由笔耕文化传播整理发布。

，

本文编号：482905