人源抗H7N9血凝素中和抗体IgG的制备及鉴定

发布时间：2017-06-28 18:06

  本文关键词：人源抗H7N9血凝素中和抗体IgG的制备及鉴定，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的 :将从全人源Fab噬菌体抗体库筛选获得的抗H7N9血凝素Fab抗体基因进行基因工程改造,以表达全分子抗H7N9血凝素中和抗体Ig G,并验证其对H7N9型禽流感病毒的中和活性。方法:用H7N9型禽流感病毒血凝素筛选全人源Fab噬菌体抗体库,构建全分子Ig G抗体重、轻链表达载体,共转染293 Free Style(293F)细胞,表达并纯化Ig G抗体。应用ELISA及Western blot实验检测抗体免疫学活性,微量中和实验及鸡胚预防保护实验检测其中和活性,血凝抑制试验判断其结合血凝素亚基。结果:成功筛选出1株全人源抗H7N9血凝素Fab抗体基因并构建Ig G真核表达载体。获得的全分子Ig G抗体重、轻链序列正确,并可特异性结合H7N9血凝素。微量中和实验证明其对H7N9型禽流感病毒有良好中和活性,中和滴度为15.6μg/m L。鸡胚预防保护实验显示抗体用量为200μg时可达100%保护率。血凝抑制试验表明其结合血凝素HA2亚基。结论:制备的重组全人源全分子抗H7N9血凝素Ig G抗体可特异性识别H7N9型禽流感病毒血凝素,对H7N9型禽流病毒有显著的中和作用,为进一步研发用于禽流感防治的抗体药物奠定基础。
【作者单位】： 南京医科大学病理学系卫生部抗体技术重点实验室;南京军区军事医学研究所;南京医科大学第二附属医院耳鼻喉科;
【关键词】： HN 全分子抗体 血凝素 中和抗体
【基金】：国家自然科学基金(81273325) 江苏省自然科学基金(BK2012527) 江苏省社会发展(BE2011842)
【分类号】：R392
【正文快照】： 2013年3月底中国疾病预防与控制中心正式公布3例新型人感染H7N9型禽流感确诊病例[1]。此后该病迅速蔓延,患者以高热、咳嗽、咳痰等流感样症状起病并迅速进展为重症肺炎、急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS),病死率超过30%[1-2]。禽流感一线药物包

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本文编号：494769