HIV-1gp140蛋白不同聚合体的纯化

发布时间：2017-06-28 19:11

  本文关键词：HIV-1gp140蛋白不同聚合体的纯化，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的对HIV-1 CN54膜蛋白gp140的不同聚合体进行纯化。方法将在哺乳动物细胞Free Style 293F中表达的gp140蛋白经过糖基化亲和层析、阴离子交换层析和凝胶排阻层析3种纯化方法进行分离,并对该纯化方法进行优化。采用ELISA方法检测不同结构抗原与广谱中和抗体的特异性反应。结果选择lentil lectin填料进行糖基化亲和层析,纯化的gp140蛋白为4.56 mg/L,得率为89.9%;选择弱阴离子填料DEAE用于阴离子交换层析,纯化的gp140蛋白为3.87 mg/L,得率为84.8%;凝胶排阻层析纯化获得了gp140蛋白的多聚体、三聚体+二聚体以及单体3种结构。不同结构的gp140蛋白可与CD4结合位点的广谱中和抗体VRC01以及结构依赖性的V3区特异性广谱中和抗体反应,具有较好的特异性,且不同聚合体在V3区结构依赖性抗体2G12的结合抗体反应上会存在一定差异。结论成功建立了HIV-1 gp140蛋白不同聚合体纯化的方法,该方法对于其他相似蛋白的纯化具有参考作用;不同结构的gp140蛋白的分离为进一步研究其免疫原性奠定了基础。
【作者单位】： 中国疾病预防控制中心性艾滋病预防控制中心传染病重点实验室;
【关键词】： HIV gp蛋白 纯化
【基金】：“十二五”科技重大专项(2012ZX10001008) 中国疾病预防控制中心青年科研基金(2010A101)
【分类号】：R392-33
【正文快照】： HIV包膜糖蛋白位于病毒的表面,介导病毒感染细胞的融合过程,对于病毒感染细胞具有关键性的作用[1]。包膜糖蛋白是机体抗病毒免疫反应的主要靶位,也是唯一能产生中和抗体的病毒免疫原,对于疫苗的研究具有十分重要的意义[2-4]。由于包膜蛋白存在跨膜区和膜内区,表达及纯化均较难

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本文编号：494995