两株新建人胚肺二倍体细胞株的细胞生物学研究

发布时间：2017-07-02 11:20

  本文关键词：两株新建人胚肺二倍体细胞株的细胞生物学研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：[目的]疫苗接种是能够抵抑人类及动物病毒感染性疾病最积极有效的办法之一。随着病毒性疾病的不断增多及人们对病毒性疾病认识清晰度的不断提高,疫苗的需求量也日渐增加。各研发机构致力于新疫苗的研发及生产,在保证疫苗的品种及数量不断增多的同时,疫苗的质量也越发受到重视,保障疫苗的安全性及有效性是保障疫苗生产质量的基础。疫苗生产质量的控制包括原材料、中间产物、终产品以及整个生产过程的控制,细胞基质作为疫苗生产的原材料,是保证疫苗质量的关键,应用于疫苗生产的细胞有原代细胞、传代细胞、人二倍体细胞,其中人二倍体细胞相比于原代细胞及传代细胞有能充分鉴定和利于标准化的优点,可实现细胞种子库系统,建立的细胞库可用于多年生产,有利于质量控制,以及其无致癌性、无外源因子污染,被认为是生产人用疫苗比较安全和稳定的细胞基质,越来越多的被用于生产人用疫苗,目前人二倍体细胞生产的疫苗已在我国大量上市,比如甲肝疫苗、脊髓灰质炎疫苗、风疹减毒活疫苗、水痘疫苗等。当然,人二倍体细胞资源稀缺,且二倍体细胞传代代次有限,为适应疫苗研发及生产的要求,需要不断建立新的二倍体细胞来供给需求。因此,越来越多的疫苗研发及生产机构致力于二倍体细胞的研发,希望培养出稳定的能用于疫苗生产的二倍体细胞来保证疫苗生产原材料的来源。本课题即是在KMB-17细胞株建株的基础上对两株新分离的人胚肺二倍体细胞株的细胞生物学特性进行研究,旨在建立一株新的适合于疫苗研发及生产的良好二倍体细胞。[方法]分别对从人胚肺分离的两株细胞(N2细胞株、N3细胞株)的细胞生物学特性进行研究,包括对细胞传代过程中细胞形态及生长状态的观察、细胞冻存复苏后细胞的存活状况及细胞形态的观察、对细胞传代过程中不同代次细胞生长曲线的绘制以及通过分析细胞周期来了解细胞传代过程中形态及活性变化；通过HE染色及免疫荧光的方法对成纤维细胞进行鉴别；通过G显带染色体核型分析检查细胞在传代过程中的稳定性；同时,我们还采用裸鼠致瘤性实验及软琼脂克隆形成实验分析了细胞的致瘤性,对细胞的安全性进行了初步评估。[结果]通过在传代过程中的细胞形态变化及活性分析,可以看出,随着细胞传代代次的增加,细胞的生长活性逐渐降低,在高代次时明显减弱,细胞只在较高代次时形态发生改变：通过HE染色及免疫荧光的方法结合,细胞为纺锤形、波形蛋白鉴定为阳性,符合成纤维细胞基本特征；通过G显带方法对染色体分析结果表明,随着传代次数的增加,这两株细胞的遗传性保持稳定,符合《中国药典》人二倍体细胞检定规程；通过细胞致瘤性分析,显示两株细胞无致瘤性。[结论]本课题根据《中国药典》生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中人二倍体细胞株建株相关规定对N2、N3细胞株的特性进行鉴别和检定,通过上诉实验方法研究,证明N2、N3两株细胞为典型的人二倍体成纤维细胞,细胞活性较好,无致瘤性,传代过程中及冻存后遗传性状稳定,可考虑作为疫苗候选细胞基质。
【关键词】：人二倍体细胞 疫苗 质量
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-16
• 1 人二倍体细胞发展史10-12
• 2 人二倍体细胞作为疫苗细胞基质的缘由及优势12-16
• 实验材料和方法16-26
• 1 实验材料16-18
• 2 实验方法18-26
• 实验结果26-42
• 1 细胞体外传代情况26-27
• 2 复苏细胞情况27
• 3 细胞电镜结果27-29
• 4 细胞生长曲线29-30
• 5 细胞周期结果30-33
• 6 HE染色和免疫荧光结果33-34
• 7 染色体核型分析结果34-36
• 8 致瘤性实验结果36-42
• 实验讨论42-50
• 结论50-52
• 参考文献52-56
• 附录一：主要缩略词56-57
• 附录二：主要溶液配置57-60
• 综述60-68
• 参考文献66-68
• 致谢68-69
• 攻读学位期间获得的学术成果69
• 个人简介69

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本文编号：509716