人g2型溶菌酶的多克隆抗体制备及其在睾丸中的表达分析

发布时间：2017-07-04 03:04

  本文关键词：人g2型溶菌酶的多克隆抗体制备及其在睾丸中的表达分析

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【摘要】：目的以真核表达的人g2型溶菌酶(human goose-type lysozyme 2,LysG2)为免疫原制备抗LysG2的兔多克隆抗体,检测LysG2在睾丸组织中的定位,为阐明其生理功能提供线索。方法对LysG2毕赤酵母GS115转化菌株进行高密度培养,甲醇诱导目的蛋白表达并通过甲壳素亲和色谱纯化,以重组蛋白为免疫原制备兔抗LysG2多克隆抗体。通过ELISA检测抗体效价后,对人体各组织、精子及精液标本进行Western印迹分析,并对人睾丸组织进行免疫组化检测。结果以毕赤酵母表达LysG2为免疫原制备的抗体具有高效价,表达谱分析表明LysG2在睾丸中有表达,在精子蛋白提取物中没有检测到其存在,在精浆中检测到了LysG2。免疫组化检测结果显示LysG2在睾丸中主要定位于间质组织的Sertoli细胞。结论本研究成功以真核表达的LysG2制备了该蛋白多克隆抗体,LysG2在睾丸Sertoli细胞有表达,并分泌到精浆中,提示LysG2可能在男性生殖系统先天性免疫中发挥作用。
【作者单位】： 上海健康医学院基础医学院;复旦大学遗传工程国家重点实验室;上海健康医学院药学院;
【关键词】： 人g型溶菌酶 毕赤酵母 多克隆抗体 睾丸 先天性免疫
【基金】：上海市自然科学基金(15ZR1421800)
【分类号】：R392
【正文快照】： 溶菌酶在自然界多种生物体内均有分布,可以水解细菌细胞壁肽聚糖的N-乙酰胞壁酸与N-乙酰氨基葡萄糖之间的β-1,4-糖苷键,从而引起细菌破裂。通常认为溶菌酶是一种重要的先天性免疫防御因子[1-2]。根据溶菌酶的分子特点,可将其分为6型:鸡型(chicken type,g-type)、鹅型(goose t

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本文编号：516079