致病性大肠埃希菌EspA抗血清制备及其对细菌粘附的影响

发布时间：2017-07-05 17:22

  本文关键词：致病性大肠埃希菌EspA抗血清制备及其对细菌粘附的影响

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【摘要】：目的制备致病性大肠埃希菌(EPEC)分泌蛋白A(EspA)抗血清,并检测其对EPEC粘附的中和作用。方法以EPEC标准株E2348/69为模板,采用PCR方法获得EspA基因,将目的基因连接载体pET32a,构建重组表达质粒pET32a-EspA,转入表达菌株BL21后用IPTG诱导表达并采用Ni-柱亲和层析法纯化EspA;以纯化EspA辅以佐剂免疫家兔,多次免疫获得抗血清,采用中和试验检测抗血清中和EPEC粘附Hep-2细胞的能力。结果成功构建EspA原核表达质粒,表达蛋白分子质量单位为37ku,与预期值相符。用纯化的表达蛋白EspA免疫家兔,对流免疫电泳检测抗血清的效价为1∶2,但稀释度≤1∶16时仍能效抑制EPEC粘附Hep-2细胞。结论 EspA抗血清具有抑制EPEC粘附Hep-2细胞作用,有望为疫苗研发的候选抗原。
【作者单位】： 川北医学院基础医学院病原生物学与免疫学实验教学中心;川北医学院分子生物学与免疫学研究所;
【关键词】： 致病性大肠埃希菌 EspA 抗血清 粘附
【基金】：四川省科技厅项目(No.2009SZ0259,2009SZ0260)
【分类号】：R378.21
【正文快照】： *?**?致病性大肠埃希菌(Enteropathogenic Escher-chia coli EPEC)是引起发展中国家婴幼儿腹泻的主要病原菌[1]。EPEC感染宿主后,产生特征损伤即粘附、脱落损伤(attaching and effacing lesion,A/E损伤),主要表现为细菌的紧密粘附和肠粘膜上皮细胞微绒毛的脱落[2-3]。A/E损伤

【相似文献】

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1 黄衍强;;大肠杆菌变种EspA的研究进展[J];右江民族医学院学报;2007年06期

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本文编号：522918