鞭虫乳清酸蛋白TtWAP-3的原核表达、纯化及其活性研究

发布时间：2017-07-05 21:21

  本文关键词：鞭虫乳清酸蛋白TtWAP-3的原核表达、纯化及其活性研究

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【摘要】：目的克隆、原核表达人鞭虫(Trichuris trichiura)乳清酸蛋白TtWAP-3,分析其生物学活性。方法分别以鞭虫成虫前端及尾端cDNA为模板,通过PCR扩增TtWAP-3编码基因;将TtWAP-3编码基因克隆至原核表达载体pET32a-sumo,构建重组表达质粒转化至大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达目的蛋白并进行Ni-NTA亲和纯化和SUMO酶酶切,用发色底物法检测rTtWAP-3对蛋白酶的抑制活性。结果在成虫前端及尾端均成功克隆获得TtWAP-3编码基因序列,构建的原核表达重组质粒pET32a-sumo/TtWAP-3在大肠埃希菌表达rTtWAP-3,该蛋白对人中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)和人蛋白酶3(PR3)有抑制活性,其抑制人NE(20nmol/L)、人PR3(200nmol/L)50%活性的浓度分别约为2.25μmol/L和5.34μmol/L。结论成功获得原核表达的重组TtWAP-3,该蛋白对人NE及人PR3均有抑制作用,为研究TtWAP-3对宿主的免疫调节作用奠定了基础。
【作者单位】： 广东医科大学寄生虫学教研室;
【关键词】： 鞭虫 乳清酸蛋白 原核表达 中性粒细胞弹性蛋白酶 蛋白酶
【基金】：广东省高等学校科技创新项目(No.2013KJCX0087) 广东医学院科技创新团队项目(No.STIF201107)
【分类号】：R383.14
【正文快照】： *?**?鞭虫(Trichuris trichiura)是人体常见寄生虫之一,能引起宿主营养不良、贫血、发育迟缓等症状,估计全球感染人数超过4亿[1]。近年研究表明,鞭虫可参与调控宿主免疫,可用于防治炎症性疾病,如用动物鞭虫-猪鞭虫卵(T.suisova,TSO)防治炎症性疾病的临床研究[2]。然而,目前对

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本文编号：523664