脑膜炎球菌表面蛋白fHBP与PorA的融合表达及其免疫原性

发布时间：2017-07-17 01:05

  本文关键词：脑膜炎球菌表面蛋白fHBP与PorA的融合表达及其免疫原性

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【摘要】：目的构建脑膜炎球菌(Neisseria meningitidis,Nm)表面蛋白fHBP重组表达质粒,并与PorA蛋白融合表达,对单抗原fHBP和融合抗原fHBP-PorA的免疫原性进行检测。方法筛选并优化fHBP和PorA基因序列,设计连接片段将PorA连接至fHBPC-端,构建重组表达质粒pET-24b-fHBP和pET-24b-fHBP-PorA,分别转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经镍柱亲和层析和凝胶过滤层析后免疫家兔,制备抗血清,采用间接ELISA、流式细胞术和微量血清杀菌力试验(serum bactericidal assay,SBA)评价抗原的免疫原性。结果经双酶切和测序鉴定,两个蛋白的重组表达质粒构建正确。重组蛋白fHBP以可溶形式表达,fHBP-PorA以包涵体形式表达,纯化后纯度均在90%以上。抗血清滴度均在1.0×10~5以上。流式细胞术检测显示,抗血清与Nm可发生特异性结合,且fHBP-Por A抗血清显示出一定的交叉反应。fHBP和fHBP-PorA抗血清对Nm29019的杀菌滴度为1∶128。结论 fHBP具有较好的抗原性和免疫原性,具备B群脑膜炎疫苗开发前景。多抗原融合策略需更多的优化考虑。
【作者单位】： 上海生物制品研究所有限责任公司第三研究室;
【关键词】： 脑膜炎球菌 fHBP蛋白 PorA蛋白 融合表达 免疫原性
【分类号】：R378.15
【正文快照】： 脑膜炎球菌(Neisseria meningitidis,Nm)感染可导致流行性脑脊髓膜炎和败血症。荚膜多糖及多糖结合疫苗能有效控制A、C、W135和Y群Nm感染,而对B群Nm(Men B)感染的预防,只有外膜囊泡疫苗(outer membrane vesicle,OMV)在局部地区获得成功[1]。OMV疫苗的主要保护性抗原组分是I类

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