腺相关病毒介导的狨猴P53基因沉默

发布时间：2017-07-19 00:22

  本文关键词：腺相关病毒介导的狨猴P53基因沉默

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【摘要】：目的在细胞和整体动物水平,利用RNA干扰技术下调绒猴p53基因表达。方法对狨猴p53基因做生物信息学分析,针对靶序列设计shRNA干扰序列,构建在腺相关病毒载体上,转染非洲绿猴肾细胞(cos-7),在细胞水平用荧光定量PCR检测p53mRNA抑制效果,以Western blot方法检测p53蛋白水平表达变化;优选shRNA干扰序列,包装含shRNA干扰序列的8型腺相关病毒,静脉注射感染狨猴;手术取少量肝脏组织,用Western blot和免疫组化方法检测p53蛋白水平的变化。结果细胞水平研究发现2个有效RNA干扰靶点,mRNA干扰效率分别为(82.7±8.1)%和(80.7±7.5)%(P0.05);蛋白表达下调(77.3±11.5)%和(73.7±10.7)%(P0.05);2只绒猴感染病毒后,经活体荧光成像分析可见病毒在肝脏、睾丸、颈部等位置分布,狨猴肝脏P53蛋白经Western blot、免疫组化分析未见明显变化。结论本研究在细胞水平实现绒猴P53基因表达下调,但整体动物水平狨猴肝脏P53蛋白表达未发现明显变化;今后需在感染方式等方面做进一步优化。
【作者单位】： 中国医学科学院医学实验动物研究所;北京大学生命科学学院;
【关键词】： AAV P RNA干扰 狨猴
【基金】：国家科技支撑计划(No.2014BAI03B01)
【分类号】：R373
【正文快照】： 。RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达,广泛应用于基因功能研究与基因治疗领域。利用RNAi的方法已经成功在啮齿类动物的受精卵中下调基因的表达,建立相关的动物模型[1],但是在狨猴上还没有相应研究。腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)是一种重要的基因载体,主

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本文编号：560485