日本血吸虫分泌蛋白和外膜蛋白的原核表达与鉴定

发布时间：2017-07-21 03:02

  本文关键词：日本血吸虫分泌蛋白和外膜蛋白的原核表达与鉴定

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【摘要】：目的原核表达和鉴定含有编码日本血吸虫分泌蛋白、外膜蛋白基因的重组质粒,为高通量筛选日本血吸虫病疫苗或诊断抗原奠定基础。方法将前期构建的28个含有分泌蛋白、外膜蛋白编码基因序列的p ET32(+)重组质粒通过化学法转到大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)菌株中进行培养,加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达。对诱导表达后的细菌进行超声破壁,以12%SDS-PAGE分别对菌液、上清及沉淀进行检测,判断目的蛋白的大小和表达分布情况。利用蛋白芯片结合抗His标签荧光抗体对重组融合蛋白表达情况做进一步鉴定。结果在IPTG终浓度0.1 mmol/L、37℃、200 r/min和4 h的诱导条件下,含有编码分泌蛋白、外膜蛋白序列的重组质粒能够在E.coli BL21(DE3)中高效表达。SDS-PAGE显示28个融合蛋白具有不同程度的表达,其中2个分布在上清中,26个分布在沉淀中,条带大小与预测大小一致。蛋白芯片成功检测到His抗体荧光信号,进一步证实了目的蛋白的表达情况。结论利用E.coli成功表达了一批编码日本血吸虫分泌蛋白、外膜蛋白的融合蛋白,为后续疫苗和免疫诊断研究奠定了基础。
【作者单位】： 湖北医药学院;湖北省血吸虫病防治研究所;江苏省血吸虫病防治研究所;
【关键词】： 日本血吸虫 分泌蛋白 外膜蛋白 原核表达 蛋白芯片
【基金】：湖北省卫生计生血防专项(WJ2015XB032)
【分类号】：R383.24
【正文快照】： 日本血吸虫病是由日本血吸虫引起的、严重危害我国人民身心健康和阻碍社会经济发展的人兽共患寄生虫病,同时也是一种免疫性疾病[1]。我国自20世纪50年代开展血吸虫病防治工作以来,已取得了巨大成就,但截至2014年底,全国仍有推算血吸虫病患者115 614例[2]。近年来,日本血吸虫基

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