含5种烈性出血热病毒的假病毒阳性参考品的制备

发布时间：2017-07-27 10:24

  本文关键词：含5种烈性出血热病毒的假病毒阳性参考品的制备

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【摘要】：目的利用慢病毒载体系统制备含有马尔堡病毒(Marburg virus)、扎伊尔型埃博拉病毒(Zaire Ebola virus)、苏丹型埃博拉病毒(Sudan Ebola virus)、拉沙热病毒(Lassa fever virus)和黄热病毒(Yellow fever virus)5种烈性病毒核酸片段的假病毒,为其核酸检测提供一种通用的阳性参考品。方法体外合成该5种病毒的目的基因片段,通过融合PCR技术将5个片段连接成一条基因,然后克隆到慢病毒表达载体上,并与其辅助载体共转染293T细胞;转染后分别于48、72 h收集培养上清,用DNase和RNase进行消化处理及纯化浓缩,最后提取核酸,利用普通PCR和实时荧光定量PCR鉴定假病毒是否包装成功。结果测序结果表明,体外合成的该5种病毒的目的基因片段已正确连接并插入慢病毒载体中;载体转染293T细胞后收集上清中的假病毒,提取核酸经上述两种PCR鉴定均可特异性检测到靶基因,表明已成功包装出含该5种出血热病毒靶基因的假病毒颗粒。结论该研究获得的假病毒颗粒可作为上述5种出血热相关烈性病毒核酸检测的通用阳性参考品。
【作者单位】： 安徽医科大学;军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室;
【关键词】： 马尔堡病毒 扎伊尔型埃博拉病毒 苏丹型埃博拉病毒 拉沙热病毒 黄热病毒 假病毒 阳性参考品
【基金】：国家自然科学基金资助项目(81501789) 军队重大专项课题(AWS15J006)
【分类号】：R373
【正文快照】： 马尔堡病毒(Marburg virus)、埃博拉病毒(Ebolavirus,EBOV)、拉沙热病毒(Lassa fever virus)和黄热病毒(yellow fever virus)属于生物战剂病毒,主要流行于非洲,均可引起严重的出血热症状,具有很高的感染率和致死率。马尔堡病毒是人类发现的第一种丝状病毒属病毒,所引发的疾病

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本文编号：580949