2型猪链球菌细胞分裂蛋白DivIVA的原核表达及纯化

发布时间：2017-07-28 14:17

  本文关键词：2型猪链球菌细胞分裂蛋白DivIVA的原核表达及纯化

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【摘要】：目的利用原核表达系统制备2型猪链球菌细胞分裂起始因子DivIVA重组蛋白并进行纯化,为研究其在调控细胞分裂中的作用奠定基础。方法以2型猪链球菌05ZYH33全基因组为模板,PCR扩增divIVA基因片段,经BamHⅠ和XholⅠ双酶切后将目的片段连接至表达载体pET28a,构建重组表达质粒pET28a-divIVA,经测序鉴定后将重组质粒转化进入表达菌E.coli BL21,以终浓度为0.1mmol/L的IPTG于37℃培养4h,诱导DivIVA蛋白表达。用Ni离子亲和层析柱分离纯化目的蛋白,SDS-PAGE和Western blot进行检测和验证。结果成功构建重组表达质粒pET28a-divIVA,并在E.coli BL21中表达主要以包涵体形式存在的DivIVA蛋白。包涵体蛋白经8mol/L脲变性溶解后经Ni离子亲和层析柱纯化,获得的目的蛋白经SDS-PAGE检测分子质量为36ku,与预期大小相符;经Western blot检测,该蛋白能被相应抗体特异性识别。结论在E.coli BL21中成功表达并纯化了DivIVA蛋白,为研究该蛋白在2型猪链球菌的细胞分裂机制奠定了基础。
【作者单位】： 南京军区军事医学研究所;南京师范大学;
【关键词】： 型猪链球菌 DivIVA蛋白 蛋白原核表达
【基金】：国家自然科学基金项目(No.81571965;No.81172794;No.81071317;No.81471920) 江苏省自然科学基金(No.BK20151091) 江苏省333工程科研资助项目(BRA2014363) 南京军区医学科技创新课题(No.ZX39)联合资助
【分类号】：R378.12
【正文快照】： *?**?细胞分裂过程是一切细胞生命进程中的重要事件,通过细胞分裂,亲本将遗传物质平均分配到子代细胞中以保证遗传物质的稳定和物种的延续。细胞分裂起始因子DivIVA是原核生物细胞分裂过程中的关键蛋白,在厚壁菌门中DivIVA是高度保守的膜结合蛋白[1]。细胞分裂过程中DivIVA作

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本文编号：584456