肺炎克雷伯菌KbvR调控因子对细菌生物膜与荚膜形成能力的影响

发布时间：2017-07-30 09:22

  本文关键词：肺炎克雷伯菌KbvR调控因子对细菌生物膜与荚膜形成能力的影响

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【摘要】：目的构建肺炎克雷伯菌LuxR家族KbvR基因缺失突变株与回补株,分析KbvR在肺炎克雷伯菌生长、生物膜形成及荚膜生成中的作用。方法通过自杀载体p KO3-Km质粒构建KbvR基因敲除株,然后扩增出包含KbvR基因编码区、启动子结合区及转录终止区的基因片段,克隆至p GEM-T-easy质粒上构建KbvR基因回补株。绘制不同菌株生长曲线,了解KbvR对细菌生长的影响。通过结晶紫定量实验检测KbvR基因对细菌生物膜形成的影响,拉丝实验、离心试验及RT-PCR检测KbvR基因对细菌荚膜形成的影响。结果成功获得KbvR基因缺失突变株及回补株,RT-PCR结果显示KbvR基因在缺失突变株中不表达,在回补株中重新表达。KbvR基因不影响细菌的生长速度,基因敲除株后细菌生物膜形成及荚膜生成能力下降。体外试管静止培养48 h,与野生株相比基因缺失突变株生物膜形成能力明显下降,而KbvR基因回补株在液体培养基表面能形成明显生物膜。结晶紫染色定量实验发现,基因缺失突变株生物膜形成能力显著低于野生株(P0.01)。超粘性实验和RT-PCR结果均显示,KbvR基因缺失突变株荚膜形成能力明显下降,说明KbvR基因影响肺炎克雷伯菌生物膜和荚膜的形成。结论 KbvR基因作为密度感应系统LuxR孤儿调控转录因子,正调控肺炎克雷伯菌生物膜的形成。荚膜是细菌生物膜形成的重要因素,KbvR基因可通过影响荚膜形成而调控生物膜的形成。
【作者单位】： 湖北医药学院基础医学院;
【关键词】： 肺炎克雷伯菌 KbvR调控子 生物膜形成 荚膜生成
【基金】：湖北省教育厅优秀中青年科技创新团队项目(NO.T201612)
【分类号】：R378
【正文快照】： 肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)是一类存在于人体上呼吸道和肠道的正常菌群,可引起呼吸道、泌尿道、伤口等部位的感染[1]。目前已成为社区获得性感染和医院内感染的重要病原菌之一[2-3]。肺炎克雷伯菌有极强的生物膜形成能力。而生物膜形成能力被证明与肺炎克雷伯菌的致

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本文编号：593529