CHIR99021对小鼠胚胎干细胞心肌细胞分化的双重作用

发布时间：2017-07-30 17:01

  本文关键词：CHIR99021对小鼠胚胎干细胞心肌细胞分化的双重作用

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【摘要】：目的研究CHIR99021在小鼠胚胎干细胞(m ESCs)分化为心肌细胞的作用。方法运用经典的悬滴培养法促进m ESCs形成拟胚体(EBs)。在不同分化时间段加入糖原合成激酶-3β(GSK-3β)抑制剂CHIR99021,诱导m ESCs向心肌细胞分化,相差显微镜在不同时间点观察不同组EBs搏动百分率。RT-PCR法检测心肌特异性转录因子Nkx2.5、α-肌球蛋白重链(α-MHC)基因表达水平的变化。Western blot法和免疫荧光染色法检测心肌特异性蛋白c Tn T的表达。实验时将不加入CHIR99021命名为对照组,分化第2~5天和第6~10天加入CHIR99021分别命名为2~5 d组和6~10 d组。结果通过悬滴培养法能够形成EBs,且形成的EBs能够出现自发性搏动并有c Tn T表达。在诱导分化的过程中,第2~5天加入CHIR99021的2~5 d组的搏动EBs百分率比对照组更高,Nkx2.5、α-MHC基因表达的水平也比对照组高;6~10 d组的结果跟2~5 d组相反。各组中都可通过Western blot和免疫荧光染色法检测到c Tn T的表达,但2~5d组的c Tn T的表达量高于对照组,6~10 d组的c Tn T的表达量低于对照组。结论GSK-3β抑制剂CHIR99021对m ESCs心肌细胞分化具有双重作用,即分化前期(2~5 d)促进分化,可获得更高的分化率,分化后期(6~10 d)结果相反。
【作者单位】： 安徽医科大学第一附属医院心血管内科;
【关键词】： 胚胎干细胞 心肌细胞 分化 GSKβ CHIR
【基金】：安徽省高等学校自然科学研究项目(编号:KJ2015ZD24)
【分类号】：R321
【正文快照】： 2016-06-27接收胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)来源于胚胎着床前的多能干细胞,在体外其可以在白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)/血清和小分子抑制剂CHIR99021/PD0325901(即“2i”)的条件下继续保持增殖和分化的能力。通过体外培养形成拟胚体(embryoid

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