人噬菌体抗体库的构建及人源性IL-17单链抗体的筛选

发布时间：2017-08-10 20:16

  本文关键词：人噬菌体抗体库的构建及人源性IL-17单链抗体的筛选

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【摘要】：目的通过噬菌体展示技术构建人源单链抗体库,筛选抗IL-17的特异性抗体并鉴定。方法通过采集35位类风湿关节炎患者的外周血淋巴细胞,提取总RNA,逆转录合成c DNA,PCR扩增人H链和L链可变区抗体基因。利用SOE-PCR法将VH和VL片段拼接成Sc Fv片段并插入噬菌体载体p CANTAB5E中,构建人源噬菌体单链抗体库。通过固相化的抗原对抗体库进行3轮筛选后,挑取单克隆进行phage-ELISA鉴定,筛选与抗原具有较强结合性的噬菌体克隆。结果成功构建库容为3.5×10~8的噬菌体抗体库,从中筛选到5株阳性克隆,ELISA证实其对抗原IL-17具有较强的结合性及中和活性。结论成功构建了人源噬菌体单链抗体库,从中获得具有抗IL-17的人源Sc Fv抗体片段,为进一步的研究和应用提供实验基础。
【作者单位】： 深圳大学第一附属医院深圳市第二人民医院;中国科学院深圳先进技术研究院抗体药物研究中心;
【关键词】： 白细胞介素- 噬菌体展示抗体库 单链抗体 类风湿关节炎
【基金】：深圳市科技创新基础研究项目(深科技创新[2013]171号)
【分类号】：R392
【正文快照】： 人白细胞介素-17(IL-17)是一种很强的促炎症细胞因子,可以通过增强促炎细胞因子释放来放大炎症反应,其在自身免疫病等疾病病理过程中的作用已引起了医学界广泛的关注,在鼠模型及人类患者的研究中都表明IL-17在类风湿关节炎发病机制中有重要作用,在类风湿关节炎小鼠模型中,利用

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