果蝇Hsp83多克隆抗体的制备及鉴定

发布时间：2017-08-11 07:19

  本文关键词：果蝇Hsp83多克隆抗体的制备及鉴定

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【摘要】：目的制备和鉴定抗Hsp83蛋白的多克隆抗体。方法利用PCR技术从果蝇cDNA中获得hsp83基因片段,构建重组质粒;将其转化到BL21(DE3)菌株中诱导蛋白表达,利用Ni-NTA亲和法纯化重组蛋白;再将纯化的蛋白免疫BALB/C小鼠制备多克隆抗体;利用免疫印迹法(Western blot)和免疫荧光染色法检测多克隆抗体的特异性。结果构建的pET28ahsp83质粒在大肠杆菌中成功表达了Hsp83融合蛋白,蛋白纯化后作为抗原免疫小鼠,获得了抗Hsp83的多克隆抗体。免疫印迹法和免疫荧光染色法检测显示,抗果蝇Hsp83多克隆抗体具有较高的特异性,并能检测出内源性Hsp83蛋白。果蝇卵巢免疫荧光染色显示,Hsp83蛋白定位在卵巢细胞的细胞质中。结论成功制备了小鼠抗Hsp83蛋白的特异性抗体,此工作为深入研究Hsp83蛋白的功能奠定了基础。
【作者单位】： 安徽师范大学生命科学学院;
【关键词】： Hsp蛋白 原核表达 多克隆抗体
【基金】：国家自然科学基金面上项目(31071266) 安徽省高校自然科学基金重点项目(KJ2015A082) 安师大研究生科研创新与实践项目(2015cxsj172) 安徽高校科研平台创新团队项目
【分类号】：R392
【正文快照】： 热休克蛋白90(HsP90)是一类在进化上高度保守的、原核和真核生物中普遍存在的分子伴侣蛋白,具有ATPase活性,主要参与蛋白的激活、蛋白质的自稳态调节、细胞周期运转的调控及多种信号传递过程[w],在致癌信号转导、应激损伤等过程中也发挥重要作用[4’5]。果绳Hsp83蛋白由/wP83

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本文编号：654830