早、晚代MEF用于人胚胎干细胞培养的能力差异及分泌机制

发布时间：2017-08-12 19:12

  本文关键词：早、晚代MEF用于人胚胎干细胞培养的能力差异及分泌机制

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【摘要】：目的比较早、晚代小鼠胚胎成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblasts,MEF)维持人胚胎干细胞(Humanembryonic stem cells,h ESCs)正常生长的能力差异,并从分泌因子角度探讨其机制,为开发基于晚代MEF的h ESCs培养体系奠定基础。方法以P3或P9代MEF为饲养层培养h ESCs;通过添加碱性成纤维细胞生长因子(Basic fibroblastgrowth factor,b FGF)调节MEF分泌因子表达;用β-半乳糖苷酶活性染色检测细胞衰老;用定量RT-PCR检测基因的m RNA表达水平;用ELISA检测TNF-a的分泌量。结果 P3代MEF增殖较快,能维持h ESCs正常增殖,而P9代MEF呈现衰老表型,不能维持h ESCs正常增殖。P9代MEF表达多种分泌因子(Grem1、Tgfb1、Inhba、Bmp4和Tgfb2)及衰老相关分泌表型(Senescence-associated secretory phenotype,SASP)因子(Il-1a和Tnfa)的水平均明显高于P3代MEF。加入b FGF后,P3和P9代MEF的Grem1、Tgfb1和Inhba的表达均明显升高,而Bmp4和Tgfb2表达均下降。结论 P9代MEF保留对b FGF的反应性,但有明显衰老表型及SASP,SASP的出现可能是P9代MEF不能维持h ESCs正常生长的重要原因。
【作者单位】： 广东医学院东莞科研中心衰老研究所;广东医学院医学检验学院;广东医学院第二临床学院;东莞市人民医院整形美容科;广东省医学分子诊断重点实验室;广东医学院研究生学院;广东医学院生物化学与分子生物学研究所;
【关键词】： 胚胎干细胞 碱性成纤维细胞生长因子 小鼠胚胎成纤维细胞 细胞衰老 分泌
【基金】：广东省医学科研基金项目(No.A2012420) 东莞市社会科技发展项目(No.2014108101047) 广东医学院博士启动基金(No.B2011005) 大学生创新创业项目(No.LYDC001,1057114018)资助
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 1998年,美国科学家Thomson从人囊胚内细胞团中分离出人胚胎干细胞(Human embryonic stem cells,h ESCs),并建立了人胚胎干细胞系[1]。h ESCs属于多潜能干细胞,具有无限增殖能力,并可分化为体内任何类型的细胞,是再生医学领域最重要的种子细胞之一[1-4]。h ESCs体外培养须满足

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本文编号：663168