使用交联剂DMP消除免疫沉淀非特异性条带

发布时间：2017-08-13 01:14

本文关键词：使用交联剂DMP消除免疫沉淀非特异性条带

【摘要】：目的消除免疫沉淀技术中免疫印迹检测到的非特异性条带,排除非特异性条带对研究蛋白质分子相互作用及磷酸化的干扰。方法检测蛋白交联剂庚二亚氨酸二甲酯(DMP)交联抗体和载体基质的稳定性及交联效果;积极寻找和优化抗原析出条件,分离出免疫沉淀复合物中抗原成分;检测析出抗原特异性条带及磷酸化水平。结果 DMP有效地将抗体共价结合于载体基质,具有较好的稳定性和交联效果,其免疫沉淀中未检测到非特异性蛋白条带;与Laemmli缓冲液相比,甘氨酸可有效地一次性析出免疫沉淀中大部分抗原;经pH值调整后,析出抗原的浓度及磷酸化水平无明显变化。结论交联剂DMP能有效地消除传统免疫沉淀技术中检测到的非特异性蛋白条带,且能应用于蛋白质磷酸化的检测。
【作者单位】：华中科技大学同济医学院附属荆州医院肾内科;华中科技大学同济医学院附属协和医院肾内科;
【关键词】： 免疫沉淀 蛋白质相互作用 蛋白质磷酸化
【基金】：国家自然科学基金资助项目(No.30900682)
【分类号】：R392.11
【正文快照】： 免疫沉淀是通过把抗体结合到某些可沉淀的基质,如蛋白A/G磁珠,利用抗原抗体特异性反应富集待测样本中目的蛋白的一种方法。这种结合抗体的基质与目的蛋白形成的复合物在高温和还原剂的作用下,抗原抗体解离,通过离心收集上清可得到目的蛋白。尽管如此,分离的目的蛋白中仍混有抗

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3 赵汝良,常永超,王建军,卢多哲,刘春锋,李凡,徐良珍;补体对免疫沉淀的抑制作用与结核杆菌特异性免疫复合物的关系[J];河南医学研究;1998年04期

4 朱炳法;;体外应用重组可溶性CD_4能封闭HIV感染[J];国外医学(微生物学分册);1988年04期

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6 毕健琨;任伟;郑晓雅;许丹;;染色质免疫沉淀分析胰岛β细胞中TCF7L2与GPR40的结合[J];重庆医学;2012年22期

7 王申五,吴冠芸,沈岩,徐晓石;人胚肝白蛋白mRNA的体外表达[J];中国医学科学院学报;1982年06期

8 ;[J];;年期

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1 张爱华;刘俊生;闭兰;张智;赵亚杰;李策生;方志正;杨晓明;;采用免疫沉淀研究人SARS免疫球蛋白的特异性反应性[A];第6次全国微生物学与免疫学大会论文摘要汇编[C];2004年