日本血吸虫重组抗原rSj26的磁分离酶联免疫分析的建立及其在低感染度血清抗体检测中的应用

发布时间：2017-08-24 08:38

  本文关键词：日本血吸虫重组抗原rSj26的磁分离酶联免疫分析的建立及其在低感染度血清抗体检测中的应用

  更多相关文章： 日本血吸虫 重组抗原Sj 抗体 磁分离酶联免疫法 ELISA

【摘要】：目的建立基于重组日本血吸虫抗原Sj26(rSj26)的磁分离酶联免疫分析(rSj26-MEIA),并将其用于检测低感染度的日本血吸虫病患者的血清抗体。方法将重组质粒pET28a-Sj26转化至大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21,用0.6 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物经镍柱亲和层析法纯化后,二喹啉甲酸(BCA)法测定蛋白含量,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)检测分析rSj26。将纯化后的rSj26与磁珠偶联(100μg抗原/mg磁珠),优化反应条件,建立rSj26-MEIA方法。用rSj26-MEIA和ELISA分别检测58份低密度感染的日本血吸虫病患者血清、30份非血吸虫病流行区阴性血清和6份并殖吸虫病患者血清,并比较两者的检测结果。结果纯化后的重组蛋白含量测定结果显示,rSj26浓度为2.5 mg/ml。SDS-PAGE结果显示,rSj26相对分子质量约27 000,主要以可溶性的形式表达。Western blotting结果显示,rSj26可被感染日本血吸虫的兔血清和小鼠血清特异识别。rSj26-MEIA优化反应条件结果显示,采用rSj26-磁珠0.2 mg(含rSj26 10μg)、血清稀释度为1∶100时,阳性血清平均吸光度(A_550值)/阴性血清平均A_550值(P/N)最大,为3.97。rSj26-MEIA和rSj26-ELISA检测低密度感染日本血吸虫病患者血清的结果显示,两者的阳性检出率均为24.14%(14/58),两者P/N分别为3.61和2.56;相关分析结果表明,两者检测的抗体A_550值间存在正相关关系(r=0.658,P0.01)。rSj26-MEIA和ELISA检测6例并殖吸虫病患者血清和30例非血吸虫病流行区阴性血清,均未出现阳性反应。结论rSj26-MEIA可作为检测低密度感染日本血吸虫血清抗体的一种新技术。
【作者单位】： 武汉血液中心检验科;华中科技大学生命科学院;华中科技大学同济医学院寄生虫学教研室;
【关键词】： 日本血吸虫 重组抗原Sj 抗体 磁分离酶联免疫法 ELISA
【基金】：国家自然科学基金(No.81402640) 湖北省自然科学基金(No.2014CFB406) 武汉市卫生计生委科研项目(No.WX15B23) 武汉市中青年医学骨干人才培养工程(No.2014-77)~~
【分类号】：R383.24
【正文快照】： 日本血吸虫(Schistosoma japonicum)相对分子质量(Mr)为26 000的谷胱甘肽-S-转移酶(Sj26GST)是WHO推荐的疫苗候选分子之一[1]。Sj26GST是血吸虫生理功能所需的重要解毒酶,对血吸虫的正常生理发挥着重要的作用,主要存在于血吸虫成虫和童虫的实质中[2]。重组r Sj26GST不仅具有谷

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 李佳英;乌云斯琴;吴金锁;;磁分离酶联免疫测定技术中性激素质控的探讨[J];职业与健康;2006年10期

2 于春玲;应用磁分离酶联免疫法评估甲状腺功能状态[J];华北煤炭医学院学报;2002年05期

3 宋伟,任冬梅,田飞,李兆英;内分泌激素的磁分离酶联免疫技术检测[J];实用医药杂志;2004年04期

4 韩少华,常连刚;磁分离酶联免疫技术检测血清甲状腺激素的临床应用[J];江西医学检验;2005年03期

5 张华川,陈丽媚,吴多能,符生苗;磁分离酶联免疫测定技术在甲状腺功能监测的临床应用[J];中国热带医学;2005年02期

6 甘邵隆;莫朝晖;谢艳红;;磁分离酶联免疫技术在测定甲状腺球蛋白抗体和甲状腺过氧化物酶抗体上的临床应用[J];中国医师杂志;2006年07期

7 徐兵;徐如梅;张建钫;沈菁;石英;伍严安;;两种磁分离酶联免疫法检测血清甲胎蛋白[J];国际检验医学杂志;2010年11期

8 黄群,韩光晓,田成功,朱大龙;应用磁分离酶联免疫法评估甲状腺功能状态[J];当代医学;2001年10期

9 范林霄,赵春芳,郭春华;磁分离酶联免疫法测定多囊卵巢综合征患者血清性激素的结果分析[J];临床医药实践;2003年06期

10 郑铁生,王书奎;磁分离酶联免疫测定男性生殖激素方法性能评价[J];江苏大学学报(医学版);2002年04期

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 王东琳;磁分离酶联免疫测定系统在细胞因子检测中的应用[D];第四军医大学;2005年

，

本文编号：730302