人血清中猪抗人淋巴免疫球蛋白双抗体夹心ELISA检测法的建立及验证

发布时间：2017-08-24 09:48

  本文关键词：人血清中猪抗人淋巴免疫球蛋白双抗体夹心ELISA检测法的建立及验证

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【摘要】：目的建立人血清中猪抗人淋巴免疫球蛋白(anti-human T lymphocyte porcine immunoglobulin,ALG)双抗体夹心ELISA检测法,并进行验证。方法以兔抗猪Ig G包被酶标板,HRP酶标记的鼠抗猪Ig G为二抗,建立人血清中ALG含量的双抗体夹心ELISA检测法,并对方法中包被浓度及二抗浓度进行优化,同时验证该方法的重复性、敏感性、准确性、特异性及稳定性。采用优化后的方法对14位严重型再生障碍性贫血(severe aplastic anemia,SAA)患者进行ALG的血药浓度监测(therapeutic drug monitoring,TDM)。结果最佳包被浓度为1∶2 000,最佳二抗稀释度为1∶8 000。参考品浓度在4.9~5 000μg/ml范围内标准曲线的四参数Logistic曲线拟合较好,R2值为0.991 1,在4.9~156μg/ml范围内的线性拟合也较好,R2值为0.991 5,批内重复性CV值均10%;其检测底限为0.39μg/ml;浓度为500、50及5μg/ml参考品的回收率为91.2%~107.0%;该方法可特异性检测出注射ALG患者血清中ALG含量;包被好的ELISA板及二抗、底物于4及37℃条件下分别保存1~3周及1~3 d后检测结果均较稳定。经DAS 3.1.4软件分析,14名经ALG治疗的SAA患者血清中ALG的曲线下面积(AOC)为(7.3±5.1)mg/(L·d)(95%CI),半衰期(t1/2)为(20.65±38.67)d(95%CI)。结论该方法具有良好的重复性、准确度及稳定性,可用于ALG的TDM。
【作者单位】： 武汉生物制品研究所有限责任公司免疫制剂室;
【关键词】： 猪抗人淋巴免疫球蛋白 酶联免疫吸附试验
【分类号】：R392
【正文快照】： 猪抗人淋巴免疫球蛋白(anti-human T lympho-cyte porcine immunoglobulin,ALG)是由人淋巴细胞免疫猪后,取血浆,经去除杂抗体、纯化、浓缩后,再经病毒去除和灭活处理,并加入适宜稳定剂制备而成。1975年,武汉生物制品研究所研制出第一代ALG,该产品已在市场上广泛使用近40年,证

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