安氏隐孢子虫ATP结合盒式转运蛋白1基因的克隆与离子转运

发布时间：2017-09-03 01:05

  本文关键词：安氏隐孢子虫ATP结合盒式转运蛋白1基因的克隆与离子转运

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【摘要】：目的研究安氏隐孢子虫(Cryptosporidium andersoni)ATP结合盒式转运(ATP-binding cassette,ABC)蛋白1基因对细胞内液和细胞外液中K~+、Ca~(2+)、Na~+和Mg~(2+)的转运作用。方法设计特异性引物,从安氏隐孢子虫基因组中PCR扩增CaABC1。构建真核表达质粒pEGFP-C1-CaABC1,采用脂质体转染法将重组质粒转染至小鼠肠上皮细胞(intestinal epithelial cells,IEC)中表达,设空白组(未转染质粒组)、对照组(转染空质粒pEGFP-C1组)和转染组(转染重组质粒pEGFP-C1-CaABC1组)。用溶液离子浓度检测试剂盒检测IEC细胞内液和细胞外液中的K~+、Ca~(2+)、Na~+和Mg~(2+)的浓度。结果扩增出544 bp的CaABC1基因,构建了真核表达质粒载体pEGFP-C1-CaABC1。转染小鼠IEC后,空白组未观察到绿色荧光,对照组和转染组均观察到绿色荧光。在细胞内液中,空白组K~+、Ca~(2+)、Na~+和Mg~(2+)的浓度分别为(5.51±0.51)、(1.98±0.06)、(108.33±1.33)和(0.93±0.03)mmol/L,对照组分别为(6.25±0.70)、(1.90±0.13)、(107.73±1.79)和(0.87±0.05)mmol/L,转染组分别为(14.84±0.90)、(3.40±0.14)、(127.64±1.49)和(1.72±0.20)mmol/L。在细胞外液中,空白组K~+、Ca~(2+)、Na~+和Mg~(2+)的浓度分别为(12.72±0.83)、(3.72±0.03)、(116.83±1.04)和(2.02±0.18)mmol/L,对照组分别为(10.11±0.90)、(3.58±0.06)、(115.89±1.86)和(1.71±0.41)mmol/L,转染组分别为(5.77±0.21)、(1.29±0.18)、(96.21±1.19)和(0.64±0.02)mmol/L。转染组K~+、Ca~(2+)和Mg~(2+)与对照组相比,差异均有统计学意义(P0.05)。结论CaABC1蛋白具有协助转运K~+、Ca~(2+)和Mg~(2+)离子的作用。
【作者单位】： 安徽农业大学动物科技学院;安徽农业大学茶与食品学院;
【关键词】： 安氏隐孢子虫 ATP结合盒式转运蛋白基因 克隆 离子转运
【基金】：国家自然科学基金(No.31001019) 安徽农业大学学科骨干建设项目(No.2014XKPY-21)~~
【分类号】：R382.3
【正文快照】： 隐孢子虫病是由隐孢子虫感染引起的人兽共患寄生虫病[1]。隐孢子虫是一类重要的机会性致病原虫,进入宿主机体后寄生于胃肠道上皮细胞,导致人和动物严重腹泻[2]。随着对隐孢子虫病的认识和检测技术的发展,研究人员试图通过建立隐孢子虫感染动物模型或体外模型来研究治疗隐孢子

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本文编号：781922