兔抗小鼠IL-23p19多克隆抗体的制备和鉴定

发布时间：2017-09-09 12:00

  本文关键词：兔抗小鼠IL-23p19多克隆抗体的制备和鉴定

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【摘要】：目的制备兔抗小鼠白细胞介素23p19(IL-23p19)多克隆抗体。方法利用分子克隆技术构建重组表达质粒p ET-16b-IL-23p19,转化大肠杆菌BL21(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,SDS-PAGE及Western blot法分析鉴定蛋白,镍柱亲和层析纯化制备蛋白;以此蛋白为免疫抗原免疫新西兰大白兔,获得抗血清,并利用亲和层析法纯化抗血清,制备兔抗小鼠IL-23p19多克隆抗体;采用ELISA检测抗体效价;Western blot法检测抗体特异性。结果重组表达载体p ET-16b-IL-23p19构建正确且IL-23p19蛋白能够在大肠杆菌BL21(DE3)中有效表达。通过多次IL-23p19蛋白免疫新西兰大白兔,成功制备兔抗小鼠IL-23p19多克隆抗体。ELISA检测确定新西兰大白兔血清效价达1∶256 000,Western blot法证实兔抗小鼠IL-23p19多克隆抗体能特异性识别小鼠IL-23p19蛋白。结论成功制备了兔抗小鼠IL-23p19多克隆抗体,抗体具有高的效价和较好的特异性。
【作者单位】： 郑州大学生命科学学院分子免疫实验室;郑州大学河南省医药科学研究院;
【关键词】： IL-p 原核表达 蛋白纯化 抗体制备
【基金】：重大新药创制科技重大专项(2012ZX09103301-022) 国家自然科学基金(U1204817,81373119,81571526) 河南省教育厅基金(16A180019)
【分类号】：R392.11
【正文快照】： 白细胞介素23(interleukin 23,IL-23)是2000年发现确定的一种细胞因子。Oppmann等[1]在研究IL-6家族细胞因子时发现了一组新的c DNA序列,其编码的一种四螺旋束细胞因子被命名为p19。p19单独存在时无生物学活性,当其与IL-12共用p40亚基结合后形成一种异源二聚体的细胞因子,才能

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本文编号：820304