装载戊型肝炎病毒核酸片段的重组MS2噬菌体衣壳的制备及其特性研究

发布时间：2017-09-12 17:43

  本文关键词：装载戊型肝炎病毒核酸片段的重组MS2噬菌体衣壳的制备及其特性研究

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【摘要】：为制备一种可以实际应用于戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)核酸检测的质控品,即装载戊型肝炎病毒核酸片段的重组MS2噬菌体衣壳(rHEPC)。根据装甲RNA技术原理,设计将MS2噬菌体基因组的5’端部分非编码区、成熟酶蛋白、衣壳蛋白以及部分复制酶起始位点等编码基因与HEV ORF2保守区部分基因序列串联并合成目标基因MS2-HEV。随后将MS2-HEV基因克隆、插入原核表达载体pET-28b中构建pET-28b-MS2/HEV重组质粒,转化大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3),经过1mM/L IPTG诱导培养4h后,SDS-PAGE鉴定表达情况;将验证的表达菌体超声破碎、离心、取上清、去除核酸杂质后再经超滤离心纯化、浓缩,电镜分析回收浓缩的rHEPC形态;梯度稀释rHEPC进行稳定性鉴定包括DNase I、RNase A抗性以及保存期三方面的稳定性试验检测。SDS-PAGE分析结果表明重组MS2-HEV基因获得有效表达,重组rHEPC纯度高无杂带;RT-PCR鉴定结果表明设计的HEV保守基因序列成功地被包装到重组rHEPC中。进一步的病毒颗粒稳定性试验结果表明制备的rHEPC能够有效抵抗高浓度的DNase I和RNase A的降解作用,并且在-20℃条件下可以持续保存7个月而无明显降解。上述结果表明制备的rHEPC达到了作为RNA病毒核酸检测阳性质控品的基本要求。
【作者单位】： 锦州医科大学畜牧兽医学院;
【关键词】： 戊型肝炎病毒 MS噬菌体衣壳 装甲RNA技术
【基金】：辽宁省自然科学基金(项目号:2014022054;2014022049)
【分类号】：R373.21
【正文快照】： 戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)是一种无囊膜的单股正链RNA病毒,基因组全长7.2-7.5kb,全基因组含有3个互相重叠开放读码框架ORF1、ORF2和ORF3[1,2,3]。ORF1主要编码与病毒RNA有关的非结构蛋白,ORF2主要编码衣壳蛋白,ORF3主要编码一种磷酸化的小蛋白[4,5]。其中,ORF2的保，

本文编号：838632