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白念珠菌HSP90与人源HSP90的克隆表达及其C端的比较分析

发布时间:2017-09-19 03:47

  本文关键词:白念珠菌HSP90与人源HSP90的克隆表达及其C端的比较分析


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【摘要】:目的分别体外表达纯化白念珠菌HSP90(CaHSP90)和人源HSP90(hHSP90)并分析C-端序列差异对其体外状态下分子聚合度的影响。方法我们将CaHSP90、hHSP90野生型及其C-端酶切碱基序列通过PCR进行扩增并通过NdeI/XhoI酶切位点连接到到pET22b+质粒中。将构建好的上述质粒转入大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中进行表达并通过Ni 2+-NTA柱以及Superdex-200快速柱层析系统(FPLC)纯化。所得蛋白通过SDS-PAGE以及分子排阻色谱(SEC)测定分子量和聚合状态。结果通过测序鉴定所有质粒构建成功,并最终纯化得到足够纯度的蛋白进行SEC分析实验。分析结果表明野生型CaHSP90和hHSP90在体外具有相似的聚合度,而C-端突变后则存在明显差异。结论 CaHSP90和hHSP90的C-端结构域对其体外聚合状态有着不同的影响,CaHSP90的C-端结构域有可能成为CaHSP90抑制剂一个潜在靶点。
【作者单位】: 上海长海医院;中国科学院大学;
【关键词】白念珠菌 HSP 蛋白结构 蛋白表达与纯化
【基金】:973子课题(2013CB531602)
【分类号】:R379.4
【正文快照】: [Chin J Mycol,2016,11(6):321-326]白念珠菌是一种条件致病菌,近年来随着抗菌药物的滥用,白念珠菌的致病率逐年上升。由于白念珠菌对药物的耐受性越来越强,我们对于白念珠菌的抗药性研究也不断深入。研究发现白念珠菌的HSP90在白念珠菌的致病以及耐药机制中有重要作用[1]。HS

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本文编号:879326

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