不同培养方法对体外诱导分化Th17细胞的影响

发布时间：2017-09-27 14:39

  本文关键词：不同培养方法对体外诱导分化Th17细胞的影响

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【摘要】：目的 :Th17细胞缺乏特异性表面标记,难以分离纯化活细胞,通过调整细胞因子浓度和不同培养方法 ,以获得高纯度Th17细胞亚群。方法:选用C57BL/6J小鼠脾脏获得单个核细胞,磁珠分选获得CD4+、CD44-Naive T细胞。建立不同Th17诱导培养体系,通过流式细胞术检测获得Th17细胞的比例,荧光定量PCR方法检测ROR-γt、IL-17 m RNA表达水平,ELISA方法检测细胞培养上清中IL-17浓度,以寻找最佳培养条件。结果:TGF-β+IL-6+IL-23可诱导Th17细胞,但比例较低;加入TNF-α、IL-1β、anti-IFN-γ、anti-IL-2可进一步提高Th17比例,但后期培养呈衰减趋势;使用U型96孔板培养Th17细胞明显优于24孔板培养,细胞分化呈稳定上升趋势,培养第9天Th17细胞可达(91.85±1.05)%。IL-17、ROR-γt m RNA与Naive T细胞相比明显上调(P0.001),IFN-γ、IL-4、Foxp3 m RNA表达量低(P0.001),细胞培养上清液中IL-17浓度明显升高(P0.001)。结论:调整细胞因子诱导方案、缩小培养面积可不同程度提高Th17细胞诱导比率,且培养面积的影响作用更为显著。
【作者单位】： 南京大学医学院附属鼓楼医院消化科;
【关键词】： Th细胞 Naive T细胞 体外诱导 细胞因子类
【基金】：国家自然科学基金(81170359)
【分类号】：R392
【正文快照】： [Acta Univ Med Nanjing,2016,36(03):335-339]淋巴细胞是适应性免疫系统的重要组成部分,其中CD4+T辅助细胞(T helper cells,Th)是介导特异性免疫反应的主要效应细胞。传统认为,经抗原刺激后,CD4+Th细胞分化为Th1、Th2细胞亚群[1-2],Th1亚群对胞内病原体的清除至关重要,而Th2

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