BC022687融合蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化、抗体制备及特异性鉴定

发布时间：2017-09-27 15:22

  本文关键词：BC022687融合蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化、抗体制备及特异性鉴定

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【摘要】：目的:构建BC022687的原核表达载体,诱导该质粒在大肠杆菌中表达并纯化其表达的融合蛋白,制备抗体并进行特异性鉴定。方法:采用RT-PCR法从18-20g体重雄性小鼠睾丸组织中扩增BC022687cDNA,经TA克隆及亚克隆方法后定向连入原核表达质粒pET-28a,将重组表达质粒转化至大肠杆菌BL-21(DL3)上,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析,用考马斯亮蓝染色及Western blot分析鉴定后,利用镍亲和层析法纯化表达融合蛋白,免疫新西兰兔,制备多克隆抗体,以诱导表达的融合蛋白为样本,Western blot实验检测抗体的特异性。结果:测序结果证实成功扩增出目的基因BC022687;酶切和测序结果证实pET-28a-BC022687原核表达载体构建成功;SDS-PAGE电泳显示表达出18.0kU的外源蛋白。Western blot检测结果显示,表达出的蛋白为6×His tag的融合蛋白,而且Ni-NTA亲和层析法纯化该重组蛋白成功;将纯化的融合蛋白免疫新西兰兔,制备获得了抗BC022687蛋白的多克隆抗体,鉴定实验显示抗体特异性好。结论:已成功构建、表达、纯化了BC022687融合蛋白,以及成功制备了其特异性抗体,为研究BC022687蛋白在精子发生中的作用奠定了基础。
【作者单位】： 武汉科技大学医学院公共卫生学院;Dept.of
【关键词】： BC蛋白 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体 精子发生
【基金】：国家自然科学基金(81300536,81172462) 湖北省自然科学基金(2013CFB331) 湖北省卫生厅青年人才项目(WJ2015Q025,QJX2012-22) 武汉科技大学绿色制造与节能减排科技研究中心开放基金(编号:C129)
【分类号】：R378.2
【正文快照】： 课题来源:国家自然科学基金(81300536;81172462);湖北省自然科学基金(2013CFB331);湖北省卫生厅青年人才项目(WJ2015Q025;QJX2012-22);武汉科技大学绿色制造与节能减排科技研究中心开放基金(编号:C129)2 Dept.of ObstetricsGynecology,Virginia Commonwealth University,Rich

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