TNF-α诱导滑膜MSCsMSCs与BMSCs凋亡的比较研究

发布时间：2017-09-28 19:20

  本文关键词：TNF-α诱导滑膜MSCsMSCs与BMSCs凋亡的比较研究

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【摘要】：目的通过比较TNF-α诱导滑膜MSCs(synovium-derived MSCs,SMSCs)与BMSCs凋亡,探讨SMSCs的抗凋亡能力。方法取患者自愿捐赠的滑膜组织及骨髓,分别采用组织贴壁法和密度梯度离心法分离培养SMSCs和BMSCs并传代,取第3~5代细胞行细胞免疫表型及三系分化鉴定后进行实验。实验分为4组,其中SMSCs、BMSCs凋亡诱导组(SMSCs、BMSCs实验组)用20 ng/m L TNF-α和10μg/m L放线菌酮对细胞进行凋亡诱导,其对应对照组以正常培养基培养。倒置相差显微镜下观察凋亡诱导细胞形态变化;培养24 h取各组细胞,采用细胞计数试剂盒8及流式细胞术检测细胞存活率及凋亡率,Western blot法检测细胞半胱氨酶天冬氨酶蛋白酶降解产物8、3(Cleaved Caspase-8、3)的表达。结果经细胞表型及三系分化鉴定培养获得的细胞均符合MSCs鉴定标准。倒置相差显微镜观察示,随凋亡诱导培养时间延长,两实验组细胞形态及生长均较对应的对照组差。培养24 h,两对照组细胞存活率均为100%,未见细胞凋亡;SMSCs、BMSCs实验组细胞存活率分别降至60.13%±8.63%及46.55%±10.54%,均显著低于对照组(P0.05),SMSCs实验组细胞存活率显著高于BMSCs实验组(t=3.152,P=0.006)。SMSCs和BMSCs对照组细胞凋亡率分别为1.12%±0.24%和1.35%±0.31%,两实验组分别增高至36.54%±8.63%及53.77%±11.52%,均显著高于对照组(P0.05),且SMSCs实验组细胞凋亡率显著低于BMSCs实验组(t=3.785,P=0.001)。两对照组细胞Cleaved Caspase-8、3蛋白几乎不表达,且SMSCs实验组和BMSCs组细胞Cleaved Caspase-8、3蛋白明显高表达;其中BMSCs实验组明显高于SMSCs实验组(t=13.870,P=0.000;t=7.309,P=0.000)。结论经TNF-α诱导培养,SMSCs凋亡明显少于BMSCs,具有更强的抗凋亡能力。
【作者单位】： 中山大学孙逸仙纪念医院骨外科;中山大学孙逸仙纪念医院生物治疗中心;
【关键词】： 滑膜MSCs BMSCs TNF-α 细胞凋亡
【基金】：国家自然科学基金面上项目(81472102) 广东省自然科学基金资助项目(2015A030313085)~~
【分类号】：R329.2
【正文快照】： MSCs是非血源性的具有多向分化能力的干细胞,可分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞及肌肉细胞等,被广泛应用于组织工程和疾病治疗研究[1]。BMSCs是常用的种子细胞之一,目前已有直接用于治疗强直性脊柱炎等炎性疾病的报道[2]。但BMSCs移植后易发生凋亡,影响了其治疗效果[3]。

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本文编号：937641