小鼠脱氧核糖核酸酶Ⅱα融合基因的原核表达及多克隆抗体的制备

发布时间：2017-09-30 17:18

  本文关键词：小鼠脱氧核糖核酸酶Ⅱα融合基因的原核表达及多克隆抗体的制备

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【摘要】：目的原核表达LHRH-TAT-DNaseⅡα融合基因(LTD),并制备多克隆抗体。方法采用PCR法克隆LTD基因片段,插入p ET-28a载体,构建重组原核表达质粒p ET-28a-LTD,转化大肠埃希菌BL21(Rossetta),经IPTG诱导表达。融合蛋白经电洗脱分离纯化后,免疫獭兔,制备LTD蛋白多克隆抗体,采用ELISA法检测抗血清效价。结果构建的重组原核表达质粒经PCR、双酶切及测序鉴定证明构建正确;纯化得到的融合蛋白相对分子质量为39 270,浓度为0.5 mg/ml,可被兔抗LTD抗体识别。血清抗体效价可达1∶6 400。结论成功原核表达了DNaseⅡ融合蛋白LTD,并制备了多克隆抗体,为进一步研究DNaseⅡ蛋白体内外抗肿瘤活性及作用机制奠定了基础。
【作者单位】： 长春中医药大学;吉林大学人兽共患病研究所人兽共患病研究教育部重点实验室;军事医学科学院军事兽医研究所;中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所;
【关键词】： 脱氧核糖核酸酶Ⅱ 融合基因 原核细胞 基因表达 多克隆抗体
【分类号】：R392;Q78
【正文快照】： 脱氧核糖核酸酶Ⅱ(deoxyribonucleaseⅡ,DNaseⅡ,EC 3.1.22.1)是哺乳动物及多种后生动物细胞内一种酸性核酸内切酶,可参与降解发育过程中积累的未消化凋亡细胞DNA,不需要依赖二价阳离子Ca2+和Mg2+,其发挥活性的最适p H为4.5~5.5的酸性条件。DNaseⅡ通过破坏核苷酸之间的磷酸二

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