戊型肝炎病毒ORF3和标签His融合真核表达载体的构建与表达

发布时间：2017-10-02 02:16

  本文关键词：戊型肝炎病毒ORF3和标签His融合真核表达载体的构建与表达

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【摘要】：目的体外构建HEV ORF3蛋白融合His标签的真核表达载体及其初步鉴定和蛋白表达。方法从1例男性31岁戊型肝炎患者血清中分离HEV RNA,逆转录合成c DNA,特异性引物扩增HEV ORF3片段,将其定向连接到pc DNA3.1(-)-His真核表达载体中,经抗生素筛选后,酶切及测序鉴定其序列正确性。采用提取质粒转染Hep G2细胞,培养96 h后裂解细胞,采用抗His-Tag抗体进行Western blot检测目的蛋白。结果从戊型肝炎患者血清中成功分离出I型HEV RNA,经抗生素筛选、酶切鉴定和测序确认pc DNA3.1(-)-HEF3-His真核表达载体构建成功,转染Hep G2细胞,经Western blot检测显示15 k Da位置有明显融合蛋白条带。结论成功构建了HEV ORF3与His标签融合的真核表达载体,体外转染Hep G2细胞后鉴定其工作良好,为后续HEV ORF3蛋白的研究奠定了基础。
【作者单位】： 辽宁省盘锦市传染病医院;盘锦市中医院;解放军第302医院肝衰竭诊疗与研究中心;
【关键词】： 戊型肝炎病毒 真核表达 融合蛋白
【分类号】：R373.21
【正文快照】： 戊型肝炎是由戊型肝炎病毒(Hepatitis Evirus,HEV)引起的病毒性肝炎。该病毒主要经由肠道传播,常引起爆发流行,主要发生在青壮年,男性高于女性[1],其发病重,病死率高。也有报道称,年龄越大其感染率越高[2]。戊型肝炎所致人群病死率在0.5%~1.5%之间,在孕妇和老年人中高达20%以

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本文编号：956979