重组铜绿假单胞菌外毒素A和pcrV基因质粒的构建及真核表达

发布时间：2017-10-10 01:15

  本文关键词：重组铜绿假单胞菌外毒素A和pcrV基因质粒的构建及真核表达

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【摘要】：目的外毒素A(toxA基因编码)是铜绿假单胞菌毒力最强的因子之一,PcrV(pcrV基因编码)是铜绿假单胞菌Ⅲ型分泌系统的关键调控因子之一。文中旨在构建重组toxA和pcrV基因的铜绿假单胞菌核酸疫苗,并在HEK-293细胞中表达目的蛋白。方法 PCR法从铜绿假单胞菌基因组基因中扩增出toxA和pcrV基因,点突变法对toxA基因进行减毒优化,随后将突变的toxAm基因和pcrV基因分别插入pIRES真核表达质粒的2个多克隆位点,构建真核双表达重组质粒pIRES-toxAm-pcrV。脂质体法将pIRES-toxAm-pcrV瞬时转染入HEK-293细胞,通过Western blot检测toxAm及pcrV在真核细胞中的表达。结果构建的真核表达质粒pIRES-toxAm-pcrV,经脂质体转染HEK-293细胞后,在其细胞内检测到目的蛋白的表达。结论成功构建pIRES-toxAm-pcrV表达载体并在转染的真核细胞中得以有效的表达,为研究铜绿假单胞菌预防性疫苗奠定了实验基础。
【作者单位】： 南京医科大学第二附属医院呼吸内科;
【关键词】： 铜绿假单胞菌 外毒素A 核酸疫苗 pcrV基因
【基金】：江苏省卫生厅面上项目(H200911)
【分类号】：R378.991
【正文快照】： 0引言铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa,PA)是常见的条件致病菌,在各种医院感染中居于前位,也是慢性阻塞性肺疾病及气管扩张症反复感染者的常见的致病菌。PA对许多抗生素具有天然或获得性耐药性,易出现多重耐药及泛耐药菌株,给临床治疗带来极大困难[1]。随着对PA致病机制

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10 王s，

本文编号：1003492