当前位置:主页 > 医学论文 > 病理论文 >

vMIP-Ⅱ在大肠杆菌表达、纯化的条件优化及活性鉴定

发布时间:2020-12-10 13:38
  目的:本研究主要对病毒基因来源的人趋化因子同源物vMIP-Ⅱ在原核细胞的表达及纯化条件进行优化,并对其活性进行鉴定,为大量获取单链vMIP-Ⅱ和将其用于趋化因子受体封闭因子的临床应用打下基础。 方法:本实验对已克隆转化的菌株进行诱导,并用Amylose resin亲和纯化目的蛋白,再经SDS-PAGE和Western blot分析纯化结果,以Transwell趋化小室和FN包被的96孔板对vMIP-Ⅱ的生物学活性进行鉴定。用MTT法检测vMIP-Ⅱ对外周血单个核细胞的毒性及对细胞增殖的影响。 结果:vMIP-Ⅱ/MBP融合蛋白在大肠杆菌中呈高效分泌型表达,SDS-PAEG可见在54KD位置有一明显的诱导表达条带。最佳诱导条件为:TB培养基、0.3mmol/L IPTG、28℃诱导4h。免疫印记结果显示在54KD位置有一明显的蓝染条带。该菌的最佳纯化条件为:30%的P2缓冲液,MgSO4用量为50ml/g湿菌,浓度为5mmol/L。该法获得的融合蛋白酶切后得到的单体活性较高,对PBMC趋化、黏附特性的抑制率达50%以上。vMIP-Ⅱ... 

【文章来源】:暨南大学广东省 211工程院校

【文章页数】:63 页

【学位级别】:硕士

【部分图文】:

MBP融合蛋白亲和层析

免疫印记


图5vMIP一11免疫印记和纯化条件的优化gSO;对细胞破碎及纯化的影响6所示,随着所用MgS04体积的增加mUg湿菌Mgso;破碎体积水平浓度图7),故上清杂蛋白浓度较高可能与,亲和层析所得融合蛋白的量较低,有关。表1不同体积MgSO;不同体积Mgso

吉姆萨染色


PBMC吉姆萨染色形态观察

【参考文献】:
期刊论文
[1]分子伴侣的多重功能[J]. 俞峻,马康涛.  生物化学与生物物理进展. 1998(02)
[2]外源基因在大肠杆菌中表达的研究进展[J]. 龙建银,王会信.  生物化学与生物物理进展. 1997(02)



本文编号:2908789

资料下载
论文发表

本文链接:https://www.wllwen.com/yixuelunwen/binglixuelunwen/2908789.html


Copyright(c)文论论文网All Rights Reserved | 网站地图 |

版权申明:资料由用户ac3e0***提供,本站仅收录摘要或目录,作者需要删除请E-mail邮箱bigeng88@qq.com