恩诺沙星多克隆抗体制备技术的优化及其ELISA分析方法的建立

发布时间：2017-10-15 03:35

  本文关键词：恩诺沙星多克隆抗体制备技术的优化及其ELISA分析方法的建立

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【摘要】：目的优化人工抗原合成条件及免疫程序,制备亲和力高、特异性强及检测限低的多克隆抗体,并建立适用中华绒螯蟹中恩诺沙星残留检测的免疫学分析方法。方法采用优化的碳二亚胺法合成免疫原(c BSA-ENR)、N-羟基琥珀酰亚胺活性酯法合成包被抗原(c OVA-ENR)及免疫方式等技术,制备恩诺沙星多克隆抗体并用方阵ELISA及间接竞争ELISA对其滴度、亲和力及特异性进行分析,进而应用于中华绒螯蟹加标样品回收率和精密度的检测。结果恩诺沙星多抗的工作浓度为1:80000,IC50为8.68ng/m L,有效检测范围为0.4~125ng/m L,与环丙沙星等竞争物的交叉反应率均小于0.5%;分别在中华绒螯蟹血淋巴、肌肉、肝胰腺样品中添加10、30和90ng/g(ng/m L)3个浓度水平的恩诺沙星,平均回收率分别为72.23%~85.45%、68.66%~74.12%和50.17%~56.30%,相对标准偏差分别为7.64%~12.26%、12.41%~22.23%和28.28%~35.40%。结论通过优化制备技术获得恩诺沙星多克隆抗体,并建立的免疫分析方法能够满足中华绒螯蟹等水产品中恩诺沙星残留检测的基本要求。
【作者单位】： 苏州大学医学部基础医学与生物科学学院;
【关键词】： 中华绒螯蟹 恩诺沙星 多克隆抗体 酶联免疫吸附测定
【基金】：苏州市应用基础项目(SYN201223)
【分类号】：R446.6;R392
【正文快照】： 恩诺沙星(enrofloxacin,ENR)是第3代喹诺酮类抗生素,因其具有高效、广谱的抗菌效果而被应用于防治水产及畜禽动物的细菌性疾病[1]。恩诺沙星可在哺乳动物肝脏内转化为人类用抗生素环丙沙星,肝微粒体内恩诺沙星和环丙沙星的代谢可产生自由基,引起细胞膜氧化损伤[2]。因此,饲料

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本文编号：1034883