检测肺孢子菌巢式PCR方法的建立及其敏感性和特异性研究

发布时间：2017-10-18 13:49

  本文关键词：检测肺孢子菌巢式PCR方法的建立及其敏感性和特异性研究

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【摘要】：目的建立检测肺孢子菌基因的特异性mtLSU巢式PCR方法,研究其在实验动物肺孢子菌感染模型的检测效果及其敏感性和特异性,以期为临床提供检测肺孢子菌定植或感染的新方法。方法依据肺孢子菌线粒体大亚基保守序列设计巢式PCR内、外引物,建立并优化检测肺孢子菌基因的巢式PCR体系。以免疫抑制诱导肺孢子菌感染大鼠模型为检测对象,比较mtLSU巢式PCR与六亚甲基四胺银(GMS)染色法检测肺孢子菌的阳性率及符合率。对阳性标本进行DNA纯化,构建分子克隆,采用倍比稀释法检测mtLSU巢式PCR的敏感性;以呼吸道感染常见的8种病原体(光滑假丝酵母菌、近平滑假丝酵母菌、热带假丝酵母菌、白色念珠菌、克柔假丝酵母菌、溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、支原体)为对照,检测方法的特异性。结果肺印片GMS染色镜检实验组大鼠,14只查到肺孢子菌包囊,检出率为70.0%(14/20),对照组检出率为0(0/20)。用mtLSU巢式PCR均能检测实验组大鼠肺孢子菌基因,阳性率为100%(20/20),对照组均为阴性。mtLSU巢式PCR法阳性率与GMS染色法比较差异有统计学意义(P0.05)。敏感性检验结果表明,mtLSU巢式PCR检测最小量为366fg的肺孢子菌基因。特异性检测显示,其他8种呼吸道常见病原体的mtLSU巢式PCR的扩增结果均为阴性。结论成功建立了检测肺孢子菌基因的mtLSU巢式PCR方法,动物模型检测结果表明该方法的敏感性高、特异性强,有望应用于临床患者标本中肺孢子菌的基因检测。
【作者单位】： 中国医科大学基础医学院病原生物教研室;中国医科大学附属一院呼吸疾病研究所;
【关键词】： mtLSU巢式PCR 肺孢子菌 敏感性 特异性
【基金】：国家自然科学基金项目(No.81370189) 辽宁省科技厅自然科学基金项目(No.2011225020)
【分类号】：R379.9
【正文快照】： 由肺孢子菌(Pneumocystis)感染导致的肺孢子菌肺炎(pneumocystis pneumonia,PCP)是免疫力低下人群最常见的并发病和主要致死原因[1]。近年来,伴随着艾滋病患者在发展中国家的不断增加和其他免疫功能低下或者免疫缺陷人群,诸如器官移植受者、原发性免疫缺陷患者、接受免疫抑制

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本文编号：1055286