截短弓形虫表面抗原SAG2C的基因克

发布时间：2017-10-19 10:29

  本文关键词：截短弓形虫表面抗原SAG2C的基因克隆、蛋白表达及其初步应用

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【摘要】：目的克隆截短的弓形虫表面抗原SAG2C基因,在大肠埃希菌中表达SAG2C蛋白,并探讨其在弓形虫病诊断中的应用。方法对已知的弓形虫SAG2C基因序列进行部分取舍,用RT-PCR技术从弓形虫Prugniaud(PRU)株的总RNA中扩增截短的SAG2基因片段,插入载体pET32a(+)中,转化大肠埃希菌BL21,IPTG诱导表达,应用Western blot和ELISA检测重组表达蛋白的免疫反应性。用重组SAG2C蛋白ELISA法检测弓形虫感染血清特异抗体,观察初步应用效果。结果从弓形虫PRU株总RNA中扩增出截短的SAG2C基因片段,成功构建了重组表达质粒pET32a(+)-tSAG2C;该重组质粒经IPTG诱导能表达可溶性大小为51ku的SAG2C蛋白。Western blot显示重组SAG2C能被弓形虫感染小鼠血清识别;以重组SAG2C蛋白、重组SAG1蛋白及BAG1蛋白ELISA检测精神病患者血清弓形虫抗体,阳性率分别为8.07%(23/285)、4.56%(13/285)和7.37%(21/285),差异无统计学意义(P0.05)。结论成功构建了重组质粒pET32a(+)-tSAG2C,表达的融合蛋白具有免疫反应性,具有用于弓形虫感染诊断的潜在价值。
【作者单位】： 广州市花都区人民医院;南方医科大学公共卫生与热带医学学院病原生物学系;
【关键词】： 弓形虫 表面抗原 克隆 蛋白表达 免疫反应性
【基金】：国家自然科学基金项目(No.31030066)
【分类号】：R37
【正文快照】： 刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种广泛寄生于人和动物的原虫,能引起人兽共患弓形虫病。人群中弓形虫抗体阳性者并不少见,但临床病例相对较少,说明绝大多数弓形虫感染均为包囊引起的隐性感染;当机体免疫功能下降或受抑制时,虫体就会活化,迅速增生繁殖,破坏宿主细胞而引起多

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本文编号：1060581