持续Wnt信号通路激活促进胚胎干细胞源造血干细胞的增殖

发布时间：2017-10-19 12:33

  本文关键词：持续Wnt信号通路激活促进胚胎干细胞源造血干细胞的增殖

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【摘要】：背景:如何提高胚胎干细胞诱导效率、促进胚胎干细胞源造血干细胞体外增殖成为目前急需解决的课题。目的:以外源性Wnt3a作为诱导剂,激活培养中的小鼠胚胎干细胞Wnt/β-catenin信号通路,观察该通路的激活是否促进胚胎干细胞向造血祖细胞的定向分化。方法:用外源性wnt3a(100μg/L)持续作用ES-E14TG2a小鼠胚胎干细胞21 d,通过细胞免疫荧光及蛋白免疫印迹检测细胞内β-catenin蛋白含量,QRT-PCR检测Wnt下游靶标基因的表达量来确定经典Wnt/β-catenin信号通路是否被激活,然后采用单层贴壁培养法诱导其向造血干细胞分化,流式细胞仪检测造血发育相关表面标志CD34+/Sca-1+,同时以QRT-PCR法检测造血相关基因的表达情况。结果与结论:ES-E14TG2a小鼠胚胎干细胞经wnt3a(100μg/L)连续培养21 d后发现β-catenin蛋白在细胞内积累;Wnt信号通路的下游靶标基因Pitx2、Frizzled、Sox17、Oct4的表达量均出现不同程度的增加,可见经典Wnt/β-catenin信号通路有被激活;单层贴壁培养法诱导其向造血干细胞分化的过程中检测到CD34+/Sca-1+细胞含量在14 d时占总细胞量高达20.2%,而对照组的仅占11.9%。造血相关基因骨形态发生蛋白4、FLK2及CD34的表达量均增加,而Smad5的表达则明显受到抑制。说明Wnt3a持续作用可激活Wnt/β-catenin信号通路,并促进ES-E14TG2a小鼠胚胎干细胞向造血干细胞的定向分化。
【作者单位】： 福州大学生物科学与工程学院;福建省医学科学研究院 福建省医学测试重点实验室;福建师范大学生命科学学院;
【关键词】： 干细胞 胚胎干细胞 造血干细胞 Wnta Wnt/β-catenin信号通路 福建省自然科学基金
【基金】：福建省自然科学基金(2012J01325) 福建省医学创新课题(2012-cx-13) 福建省省属公益类科研院所基本科研专项(2010R1034-1)~~
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 0引言Introduction多能性的胚胎干细胞可以分化成体内三个胚层的所有细胞类型[1],是临床再生治疗的理想细胞来源,胚胎干细胞的这一特性使它成为令人感兴趣的一个研究课题。各种不同技术已被用于促进造血分化,比如细胞共培养或添加各种造血诱导剂及细胞因子。胚胎干细胞的体外

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本文编号：1061138