一种小鼠睾丸细胞涂片的快速制备方法

发布时间：2017-10-20 06:21

  本文关键词：一种小鼠睾丸细胞涂片的快速制备方法

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【摘要】：目的建立一种用于免疫荧光实验的小鼠睾丸细胞涂片的快速制备新方法。方法分别给出生后16、21、28 d和120 d的小鼠腹腔注射秋水仙素,3 h后取睾丸组织剔除白膜,分离曲精小管进行剪碎,加入冷PBS重悬细胞,过滤,并用冷PBS洗涤细胞3次,然后低渗处理,最后经多聚甲醛固定后铺片。对细胞核进行DAPI染色,并以21 d小鼠睾丸涂片为例进行免疫荧光实验,检测所制备的细胞涂片的质量。结果所制备的小鼠睾丸细胞涂片经DAPI染色,每张细胞涂片均分布大量生殖细胞,背景清晰,根据细胞核的大小与着色,可初步判断生殖细胞类型;用不同发育阶段小鼠所制备的睾丸细胞涂片,细胞分布类型有很大差异,其中28 d小鼠制备的睾丸细胞涂片中生殖细胞类型最多;以21 d小鼠睾丸细胞涂片为例进行免疫荧光实验,红色和绿色荧光标记的目标蛋白在精母细胞中表达清晰,背景干净,说明所制备的细胞涂片适合于免疫荧光检测。结论成功建立了一种快速制备小鼠睾丸细胞涂片的新方法。
【作者单位】： 中南大学湘雅三医院药学部;中南大学药学院;中南大学湘雅三医院医学实验中心;
【关键词】： 小鼠睾丸 细胞涂片 低渗处理 免疫荧光技术 精子发生
【基金】：国家自然科学基金(81170615) 湖南省科技厅项目(S2010R1040)
【分类号】：R361.2
【正文快照】： 精子发生障碍是引起男性生殖障碍的一个主要原因[1-2]。精子发生过程主要包括精原细胞有丝分裂、精母细胞减数分裂和精子细胞变态成形3个阶段[3],其中,每个阶段都有一些睾丸特异性基因发挥着重要作用,如:精子相关抗原4样蛋白(sperm-associated antigen 4-like protein,SPAG4L)

【参考文献】

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本文编号：1065720