人脂肪间充质干细胞体外诱导为肝脏样细胞的试验研究

发布时间：2017-10-20 15:17

  本文关键词：人脂肪间充质干细胞体外诱导为肝脏样细胞的试验研究

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【摘要】：目的探讨人脂肪间充质干细胞体外分离、培养、鉴定及向肝脏样细胞分化的方法。方法采用胶原酶Ⅰ消化离心法获得人脂肪间充质干细胞(human adipose-derived mesenchymal stem cells,hADSCs),原代培养并采用流式细胞仪检测干细胞相关表面抗原白细胞分化抗原13(Cluster differentiation13,CD13)、CD73、CD34、CD45和人类白细胞DR抗原(human leukocyte antigen DR,HLA-DR)的表达,采用诱导培养基将hADSCs向成脂及成骨方向诱导。采用两阶段细胞因子诱导法诱导hADSCs,并观察其形态变化;采用实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)法及细胞免疫组化法检测肝细胞相关基因甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)、细胞角蛋白18抗体(cytokeratin18,CK18)、细胞角蛋白19抗体(cytokeratin19,CK19)等在肝脏样细胞中的表达;采用糖元染色法(Periodic acid-Schiff stain,PAS)检测肝脏样细胞糖原合成情况。结果用消化离心法获取的hADSCs大小均匀,呈梭形的成纤维细胞样,体外能长期培养存活,并保持不分化状态;流式细胞仪检测显示hADSCs高表达CD13、CD73,低表达CD34、CD45及HLA-DR;hADSCs体外可被诱导成脂肪细胞及成骨细胞。hADSCs经成肝诱导后,细胞形态由梭形变为多角形的肝脏样细胞,这些肝脏样细胞高表达血清白蛋白(serum albumin,ALB)、AFP、CY3P4等基因,并表达肝细胞相关性蛋白HepPar-1、AFP、CK18、CK19。PAS染色显示肝脏样细胞胞质呈红色表现。结论利用消化离心法在体外成功构建了人原代脂肪干细胞系,可长期存活,反复传代,经诱导后可转化为有功能的肝脏样细胞,为脂肪间充质干细胞作为生物人工肝及肝组织工程的种子细胞提供理论依据。
【作者单位】： 解放军总医院南楼临床部消化内科;解放军总医院输血科干细胞实验室;
【关键词】： 人脂肪间充质干细胞 分离 鉴定 诱导 肝脏样细胞
【基金】：北京市科技新星计划基金资助项目(ZXKTYANLI001)~~
【分类号】：R329
【正文快照】： 我国是一个乙型肝炎大国,肝炎病毒携带率高达10%[1];随着经济发展和生活方式的改变,大量饮酒所致的酒精性肝病呈逐年上升趋势;近年来保健、减肥药物的使用以及药物的滥用,药物性肝病逐年上升;随着环境污染的加重,自身免疫性肝病、遗传性肝病也呈逐年上升趋势。这些数目巨大的

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