酵母双杂交筛选与CVB3 VP3相互作用的人心脏蛋白

发布时间：2017-10-23 11:33

  本文关键词：酵母双杂交筛选与CVB3 VP3相互作用的人心脏蛋白

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【摘要】：目的从人心脏cDNA文库中筛选与B3型柯萨奇病毒(coxsackievirus group B type 3,CVB3)结构蛋白VP3相互作用的蛋白,为进一步研究CVB3分子致病机制提供新的线索。方法构建酵母双杂交重组质粒(pGBKT7-VP3),转化至感受态酵母菌AH109,检测BD-cMyc-VP3融合蛋白自激活,应用酵母双杂交筛选与CVB3VP3相互作用的人心脏蛋白。对阳性候选克隆进行测序和同源性比对分析;α-半乳糖苷酶活性定量分析VP3与各阳性蛋白之间相互作用的强弱。结果诱饵质粒pGBKT7-VP3构建成功,检测到BD-cMyc-VP3融合蛋白在AH109中表达,且诱饵蛋白VP3在酵母中不存在自激活,从人心脏cDNA文库中筛选到10个与CVB3VP3相互作用的蛋白:真核翻译起始因子4A2、羟酰辅酶A脱氢酶三官能蛋白转录变体3、肌钙蛋白I3型、平滑肌蛋白3、线粒体乙醛脱氢酶2等。结论本研究成功应用酵母双杂交技术筛选出与CVB3VP3相互作用的10个蛋白。为研究CVB3引起心肌炎和心肌疾病的分子致病机制提供了一些新的线索。
【作者单位】： 南昌大学医学院微生物学教研室;南昌大学第二附属医院;
【关键词】： 酵母双杂交 CVB VP 蛋白相互作用
【基金】：国家自然科学基金(No.81160196,No.30660010) 江西省青年科学家培养项目(20133BCB23005) 江西省研究生创新专项资金项目(YC2012-S020) 江西省自然科学基金(20120BAB205042)联合资助~~
【分类号】：R378
【正文快照】： Screening CVB3VP3interacting proteins from cDNA libraryof human heart by yeast two hybridizationZHANG Zhi-qin1,ZHAO Ying-jie1,XIA Yan-hua1,WANG Jing1,XIANG Guo-shi 1,ZOU Ye-qing2,HUANG Xiao-tian1(1.Department of Medical Microbiology,Medical College,Nanch

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 刘发娣;余克花;罗达亚;徐秋芳;莫冰;罗军;刘晶星;黄孝天;;酵母双杂交技术筛选与CVB3 VP1直接作用的细胞蛋白[J];中国人兽共患病学报;2009年10期

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3 张静怡;赵颖洁;李秀珍;方舒;何冰清;刘曦;罗军;黄孝天;;酵母双杂交筛选与CVB3 3A相互作用的人心脏蛋白[J];中国人兽共患病学报;2014年02期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 郝庆钦;周建平;韩旭;刘培;许秀丽;温新宇;王玲;田亚平;;一对高亲和力抗人肌钙蛋白I单克隆抗体的制备及鉴定[J];标记免疫分析与临床;2014年04期

2 赵艳玲,马和平,李柏岩;家兔主动脉血管平滑肌细胞内钙动员及小檗胺作用的共聚焦研究(英文)[J];中国药理学与毒理学杂志;2000年02期

3 金桂林;莫冰;刘发娣;徐秋芳;刘昕;应颖;赵颖洁;罗军;黄孝天;;CVB3损伤HeLa细胞高尔基体结构的机制研究[J];中国人兽共患病学报;2012年06期

4 张静怡;赵颖洁;李秀珍;方舒;何冰清;刘曦;罗军;黄孝天;;酵母双杂交筛选与CVB3 3A相互作用的人心脏蛋白[J];中国人兽共患病学报;2014年02期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 徐薇;新型chitosan-DNA疫苗诱生CVB3特异粘膜免疫及其预防病毒性心肌炎的研究[D];复旦大学;2003年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 徐薇,沈燕,陈瑞珍,熊思东;含融内体多肽的新型B3型柯萨奇病毒DNA疫苗对小鼠病毒性心肌炎的预防作用[J];中华医学杂志;2004年04期

2 黄孝天,陈洪,吴峗,陈宏新,刘晶星;重组柯萨奇B3病毒VP1基因的穿梭表达载体的构建及鉴定[J];中国人兽共患病杂志;2004年05期

3 黄孝天,陈宏新,陈洪,吴斌贝,刘晶星;柯萨奇病毒B3型VP1基因在酿酒酵母中的表达[J];中国人兽共患病杂志;2005年07期

4 刘发娣;余克花;罗达亚;徐秋芳;莫冰;罗军;刘晶星;黄孝天;;酵母双杂交技术筛选与CVB3 VP1直接作用的细胞蛋白[J];中国人兽共患病学报;2009年10期

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本文编号：1083186