定点突变阻止金黄色葡萄球菌α-溶血素溶血活性

发布时间：2017-10-23 21:17

  本文关键词：定点突变阻止金黄色葡萄球菌α-溶血素溶血活性

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【摘要】：金黄色葡萄球菌分泌的α-溶血素是导致肺炎的重要致病因子。为进一步研究金黄色葡萄球菌α-溶血素(α-hla)的分子致病机理以及对其进行免疫预防,对α-hla第35位氨基酸进行了定点突变。用聚合酶链式反应(PCR)技术,从S.aureus wood46株基因组中扩增出α-hla基因,再利用重叠延伸PCR技术,将第35位带正电荷的组氨酸(密码子为CAC)突变为非极性的亮氨酸(密码子为CTC)。hlaH35L基因测序结果显示第35位的组氨酸突变为亮氨酸,构建的重组表达质粒pET-28a-c(+)/hla和pET-28a-c(+)/hlaH35L在E.coli BL21(DE3)中得到表达,重组蛋白α-Hla及hlaH35L大小均为33.4 kDa,α-Hla引起兔红细胞溶血,hlaH35L未引起兔红细胞溶血。成功表达并获得了失去溶血毒性的重组蛋白hlaH35L。
【作者单位】： 黑龙江八一农垦大学动物科技学院;黑龙江八一农垦大学生命技术学院;
【关键词】： 金黄色葡萄球菌 α-溶血素 定点诱变 原核表达 溶血活性
【基金】：国家自然基金委资助项目(31072120) 黑龙江省农垦总局资助项目(HNK11A-08-01-04)
【分类号】：R378
【正文快照】： 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)是一种革兰氏阳性菌,广泛分布于自然界,常存在于人和动物的体表、鼻咽部及肠道。是引起人类和动物皮肤、关节、软组织等多种感染以及致命性败血症和肺炎的主要病原菌之一。S.aureus感染后在体内大量增殖,并产生和分泌毒素(如α

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本文编号：1085397