小鼠腹水JWA单克隆抗体的制备鉴定

发布时间：2017-10-23 22:12

  本文关键词：小鼠腹水JWA单克隆抗体的制备鉴定

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【摘要】：建立小鼠腹水中JWA单克隆抗体(Monoclonalantibody,mAb)的制备方法及鉴定,获得高纯度、高效价的JWA单克隆抗体。对预先用弗氏不完全佐剂处理的小鼠腹腔接种JWA单克隆抗体杂交瘤细胞,收集小鼠腹水、离心,采用Protien G亲和柱层析法进行亲和层析纯化JWA单克隆抗体,并采用SDS-PAGE检测方法分析纯化抗体的纯度。分别运用细胞免疫荧光、免疫印迹技术鉴定纯化的抗体特异性。BCA法测定纯化后JWA单抗的浓度为6.79 mg/mL;SDS-PAGE电泳显示纯化的抗体只有IgG的重链和轻链,而没有其它杂蛋白带;纯化后的JWA单抗在免疫荧光实验可以检测到细胞中JWA蛋白在胞浆中呈丝状均匀分布,与前期实验结果一致。免疫印迹实验中1∶800、1∶400均可以得到清晰的目的条带。用Protein G亲和层析法获得了高纯度和较高效价的JWA单克隆抗体,这将为JWA蛋白的基础和应用研究提供技术支持。
【作者单位】： 南京医科大学;
【关键词】： JWA基因 单克隆抗体 腹水 亲和层析
【基金】：国家自然科学基金重点项目(No.30930030) 江苏省优势学科建设工程资助项目(环境卫生与预防医学)
【分类号】：R392
【正文快照】： JWA(GenBank:AF070523,1998)是周建伟等从培养的原代人气管和支气管上皮细胞中分离并克隆的,受全反式维甲酸(ATRA)诱导的新的细胞骨架结合蛋白[1]。JWA在人染色体定位是3p14;cDNA全长为2.1 kb,其编码蛋白定位于细胞浆,含188个氨基酸,JWA在生物进化中保守。JWA基因是一种环境应

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